Nuevos diseños de inmunosensores electroquímicos para aplicaciones en bioanálisis

Résumé

El objetivo principal de este trabajo ha sido el desarrollo de inmunosensores electroquímicos para la detección de analitos de interés biológico (microorganismos patógenos y marcadores tumorales). En primer lugar, se han desarrollado inmunosensores a mperométricos para la detección de Staphylococcus aureus basados en monocapas autoensambladas (SAMs) empleando diversos formatos y marcadores enzimáticos. En segundo lugar, se han preparado dos tipos de inmunosensores impedimétricos basados en el emp leo de electrodos serigrafiados de oro como transductores electroquímicos para la determinación de Escherichia coli. Y, por último, se describe el desarrollo de inmunosensores voltamperométricos duales para la detección simultánea de PSA libre (fPSA) y PSA total (tPSA) empleando distintos tipos de electrodos serigrafiados como superficie sensora (SPCE, SPGE y SPC-nAu-Es). Para ello, se ha llevado a cabo la optimización del proceso de fabricación de cada uno de los inmunosensores y de los proced imientos de inmunoensayo correspondientes, se han seleccionado las condiciones óptimas de trabajo, se ha evaluado la estabilidad y se han determinado las características analíticas de cada inmunosensor. Por último se ha demostrado la aplicabilidad de los inmunosensores desarrollados para la detección de los analitos seleccionados en muestras reales: leche (amperométricos), aguas de grifo y de río (impedimétricos) y células tumorales (voltamperométricos). Los resultados obtenidos demuestran que: - el empleo de superficies electródicas de oro modificadas con SAMs de cadena corta constituye una metodología adecuada para la preparación de inmunosensores amperométricos aplicables a la determinación de bacterias; - la espectroscopía de impedancia electroquímica es una técnica eficaz para detectar interacciones antígeno-anticuerpo, más efectiva cuando los sesores e preparan a partir de anticuerpos tiolados; - los inmunosensores duales desarrollados constituyen una herramienta útil para llevar a cabo el análisis simultáneo de fPSA y tPSA siendo, además, fácilmente aplicables a estudios de investigación sobre el cáncer por lo que constituyen una alternativa interesante a los ensayos clásicos al mejorar y acelerar la investigación.