Obtención de proteínas recombinantes útiles para el diagnóstico de fasciolosis ovina

Resum

La infección por F. hepatica no afecta por igual a las diferentes especies animales, los ovinos son muy sensibles, lo que implica mayores pérdidas económicas directas (muerte de los animales, especialmente en la fasciolosis aguda), e indirectas (decomiso de hígados, disminución de las producciones y gastos en tratamientos de los animales afectados). En el apartado 1 mediante el cribado de una biblioteca de ADNc con sueros de ovejas infectadas de forma experimental (9ª s.p.i.) se seleccionaron 19 clones; después de enfrentar estos clones a sueros de ratas con fasciolosis experimental obtenidos a las 3 s.p.i., observamos reacción sólo con 3 clones (5, 10 y 17), por lo que decidimos secuenciarlos y confirmar que contenían ADN del trematodo. La secuencia de los clones 5, 10 y 17 revelaron la presencia de marcos de lectura completos (open reading frame, ORF), con un codón de inicio que codificaba para la metionina (ATG), y un codón de finalización. Con la expresión de estos clones se obtuvieron 3 proteínas de 12'3 kDa (rFhRSA), 16 kDa (rFhMAV) y 2'9 kDa (rFhAPS). Mediante ELISA y sueros de ovejas y ratas con fasciolosis experimental, comprobamos que los mejores resultados se obtenían con la proteína de menor peso molecular (rFhAPS), y la determinación de su actividad funcional reveló que se trataba de una serín-proteasa. En el apartado 2, con objeto de valorar la utilidad de la proteína rFhAPS, se emplearon distintas técnicas de diagnóstico en ovinos infectados de forma experimental. Se dispuso de 49 corderos procedentes de una explotación calificada sanitariamente que nunca habían estado en el pasto. La infección de los animales se realizó administrándoles por vía oral metacercarias de F. hepatica. En este estudio se empleó la pauta de infección conocida como trickle infection y que consiste en administrar un pequeño número de metacercarias de forma repetida, concretamente 25 metacercarias por día, durante 7 días consecutivos. Los