Estudio de la función biológica de la protimosina α mediante la caracterización de sus dianas moleculares

Resum

La Protimosina alfa (ProT) es una proteína ácida (pI 3,55) ampliamente distribuida en los tejidos de mamíferos, particularmente abundante en las células linfoides, y con una secuencia muy conservada. Presenta una señal de localización nuclear en el extremo C-terminal, y los primeros 28 aminoácidos del extremo N-terminal se corresponden con la Timosina alfa1 (T1), de la cual la ProT es su precursor. La ProT es fosforilada en residuos de treonina en células en proliferación por la isoforma M2 de la piruvato quinasa. Además, es una proteína multifuncional esencial para la división celular, durante la cual migra al núcleo y afecta a la actividad de la cromatina. También, se ha descrito una actividad anti-apoptótica de la ProT en el citoplasma mediante el bloqueo de la formación del apoptosoma. Con el propósito de esclarecer los mecanismos por los que la ProT participa en la actividad celular hemos llevado a cabo un estudio de sus interacciones basado en la estabilización de interacciones proteína-proteína mediante formaldehido. En este estudio, a partir de los componentes celulares de células Jurkat en proliferación, hemos aislado seis complejos en el rango de 40-22 kDa, cuyo análisis por espectrometría de masas demostró la novedosa asociación de la ProT con la proteína SET (complejos 40 kDa y 22 kDa) y las proteínas ANP32A y ANP32B (34 kDa, 30 kDa, 28 kDa y 25 kDa), a las que acompañan proteínas relacionadas con la actividad mitocondrial y la movilización de componentes celulares, lo que confirma la localización citoplasmática de estos complejos. Experimentos de coinmunoprecipitación cruzada, cromatografía de afinidad a ProT y co-purificación cromatográfica confirmaron la interacción de la ProT con SET, ANP32A y ANP32B en el citoplasma de células Jurkat. El estudio de la evolución de estos complejos en células Jurkat en las que se indujo el descenso de la actividad proliferativa y la apoptosis con posterior tratamiento con formaldehido mostró que las interacciones de la ProT con SET, ANP32A, ANP32B y los demás componentes de los diferentes complejos se relacionan con la actividad proliferativa y con la supervivencia celular para contribuir al control de la apoptosis. La presencia de complejos de la ProT similares en células 293T indicó que esta función citoplasmática de la ProT puede ser extensible a células humanas.