Estudio y comparación de la microbiota intestinal en individuos no celiacos frente a pacientes diagnosticados de enfermedad celiaca

  1. Nistal González, María Esther
Supervised by:
  1. Francisco Javier Casqueiro Blanco Director
  2. Santiago Vivas Alegre Director

Defence university: Universidad de León

Fecha de defensa: 10 October 2011

Committee:
  1. Juan Miguel Rodríguez Gómez Chair
  2. Luis Sáenz de Miera Carnicer Secretary
  3. José María García Ruiz de Morales Committee member
  4. José Moisés Laparra Llopis Committee member
  5. Santiago Gutiérrez Committee member

Type: Thesis

Abstract

La enfermedad celiaca (EC) es una enfermedad inflamatoria del intestino delgado causado por una respuesta inapropiada a las proteínas del gluten del trigo y otras proteínas similares del centeno y la cebada en individuos genéticamente susceptibles. Además del gluten, otros factores ambientales podrían jugar también un papel importante en el desarrollo de la enfermedad celiaca. La presencia de una bacteria de morfología bacilar anclada en la parte alta del intestino delgado de niños con EC, que no aparecía en individuos sanos, planteó por primera vez el posible papel de las bacterias en la patogénesis de la EC. En los últimos años, se ha descrito también la existencia de diferencias cuantitativas y cualitativas en la composición de la microbiota fecal y duodenal entre niños con EC e individuos control. Teniendo en cuenta todas estas evidencias científicas, nos planteamos llevar a cabo un estudio comparativo de la microbiota intestinal en individuos no celiacos frente a pacientes diagnosticados con EC. El estudio de la microbiota duodenal mediante colección de clones de una región del ADNr 16S determinó que el tratamiento de la EC mediante la retirada del gluten de la dieta, ocasiona cambios en la composición de la microbiota del intestino delgado de los pacientes adultos enfermos celiacos tratados. Además, se observó también que la edad es uno de los factores que determina las diferencias entre las comunidades de bacterias de los niños y los adultos, tanto entre individuos no celiacos como entre pacientes diagnosticados de EC. Por otro lado, se llevó a cabo un estudio molecular de la microbiota duodenal capaz de crecer en un medio de cultivo con gluten como única fuente de nitrógeno, para ello se cultivaron biopsias procedentes de niños y adultos tanto sanos como enfermos. No se observó un perfil de especies bacterianas asociadas a la EC o a los individuos sanos, pero si se que la microbiota duodenal capaz de crecer en ese medio estaba dominada por especies del género Streptococcus. Por último, se caracterizó la microbiota fecal tanto de individuo sanos como de pacientes enfermos celiacos activos y tratados mediante electroforesis en gradiente desnaturaliante (DGGE) empleando cebadores universales. Los resultados mostraron una microbiota fecal predominante asociada a los individuos sanos, sugiriendo que los pacientes enfermos celiacos podrían presentar cambios en su microbiota fecal como consecuencia de la enfermedad. Para completar el estudio se caracterizó también la microbiota presente en la muestras fecales mediante el empleo de oligonucleótidos específicos de grupo. Los pacientes enfermos celiacos tratados mostraron una reducción en la diversidad de bacterias fecales del grupo Lactobacillus y del grupo Bifidobacterium frente a los individuos celiacos activos y sanos, lo cual podía ser explicado por la ausencia de gluten en la dieta. Sin embargo, no se encontró una relación definida entre las diferentes especies del género Bifidobacterium, Lactobacillus, Bacteroides y Clostridium con la EC.