Identificación y análisis funcional de genes de Saccharomyces cerevisae implicados en la fosforilación de N-oligosacáridos

Résumé

Esta Tesis Doctoral recoge el trabajo realizado por el doctorando en el campo de la N-glicosilación de proteínas. La N-glicosilación es una modificación post-traduccional de las proteínas de sumo interés e importancia puesto que afecta a su estabilidad y función. También está relacionada con determinadas enfermedades humanas como los Desórdenes Congénitos de Glicosilación (CDG). Los Capítulos I y II se centraron en la búsqueda a escala genómica, identificación y análisis funcional de genes de Saccharomyces cerevisiae implicados en el proceso de fosforilación de N-oligosacáridos. Se encontraron 199 genes cuya función es requerida, directa o indirectamente para el proceso mencionado. El Capítulo III recoge los estudios realizados sobre la influencia de la actividad de la V-ATPasa en las distintas etapas de la síntesis de N-oligosacáridos que se llevan a cabo en el Aparato de Golgi. Se ha encontrado que la actividad de esta enzima influye, de una forma determinante, fundamentalmente sobre los procesos que tienen lugar en la región de trans-Golgi. En el Capítulo IV se ha identificado el gen responsable de la mutación mnn3 y se ha caracterizado desde un punto de vista funcional. En el Capítulo V se analizaron y discutieron los cambios en los patrones de expresión génica globales de los mutantes mnn2 y mnn3, en relación con el patrón de la cepa silvestre. Por último, el Capítulo VI recoge un estudio sobre las características de los sitios de N-glicosilación en proteínas, con especial atención a los factores que afectan a su utilización como receptores de N-oligosacáridos. El trabajo incluye la incorporación de nuevos sitios de glicosilación en proteínas modelo, y el análisis de su grado de ocupación por N-oligosacáridos en estas proteínas. Parte del trabajo presentado en esta Tesis ha sido publicado en cuatro artículos científicos en revistas internacionales de prestigio.