Detección, identificación y cuantificación de organismos modificados genéticamente (OMG) en alimentos mediante PCR a tiempo real

Zusammenfassung

En este trabajo se han desarrollado métodos analíticos específicos, sensibles, fiables y reproducibles basados en técnicas moleculares (PCR y chip), para detectar, identificar y cuantificar organismos modificados genéticamente (OMG) que puedan estar presentes en ingredientes, aditivos y/o aromas utilizados en alimentación humana y/o animal. Este trabajo responde a la actual normativa europea de etiquetado asi como el derecho de información del consumidor. En primer lugar se han optimizado y estandarizado protocolos de extracción y purificación de ADN de cinco matrices alimentarias: semillas, harinas y extractos de proteínas: grasas y aceites; lecitinas: almidón y cerveza. También se han desarrollado métodos de detección, identificación y cuantificación basados en PCR convencional y PCR a tiempo real para nueve especies vegetales: colza, patata, tomate, maíz, algodón, girasol, arroz, cebada y trigo. Estos métodos han demostrado que pueden ser utilizados como controles endógenos de referencia. Se han caracterizado cinco líneas transgénicas comercializadas: la secuencia completa del evento MON810 presente en el maíz YieldGard(r), así como su secuencia de inserción adyacente correspondiente al extremo 3': una región comprendida entre el terminador nos y el promotor r-act, situada entre dos secuencias transgénicas insertadas en tándem en la línea de maíz GA21; las regiones correspondientes a los transgenes insertados en la línea de colza OXY-235, desde el promotor 35S-CaMV hasta el final del gen nitrilasa, y la región correpondiente al gen EPSPS en el algodón Roundup Ready(r) . A partir de estas secuencias se han desarrollado métodos de detección, identificación y cuantificación basados en PCR convencional y PCR a tiempo real de los siguientes OMG: maíz MON 810 y GA21, colza OXY-235 y algodón Roundup Ready(r). Además, se han caracterizado dos regiones de las construcciones insertadas en la varied