Analysis of the role of Cdc14/Flp1 in checkpoint response to genotoxic stress in "Schizosaccharomyces pombe" = Análisis de la función de Cdc14/Flp1 en la respuesta a estrés genotóxico en "Schizosaccharomyces pombe"

Resumen

El estudio presentado en esta Tesis Doctoral se centra en la investigación de la función de la fosfatasa Flp1p de Schizosaccharomyces pombe (también conocida como Clp1p), perteneciente a la familia Cdc14, en los mecanismos de vigilancia celular, especialmente en la cascada de señalización en respuesta al estrés replicativo y al daño en el DNA. Para ello se llevaron a cabo análisis genéticos y bioquímicos comparados de las mencionadas respuestas en cepas silvestres y mutadas para flp1, así como estudios de la expresión génica en respuesta a estrés. En el marco de esta tesis se está desarrollando así mismo un modelo matemático del checkpoint de replicación en colaboración con el grupo de Biología Computacional de Sistemas del Instituto Max Planck de Genética Molecular de Berlín, Alemania. En esta Tesis Doctoral se ha demostrado la estrecha relación de Flp1p de S. pombe, con la quinasa Cds1p (principal efector del checkpoint de replicación) en situaciones de estrés replicativo y se describe por primera vez la implicación de Flp1p en el checkpoint de replicación. La respuesta celular a estrés replicativo produce la salida de Flp1p al núcleo, muy probablemente por medio de fosforilación directa de la fosfatasa por Cds1p. Por otra parte la actividad de Cds1p en respuesta al checkpoint se ve reducida en células delecionadas para Flp1p. La alteración de los niveles proteicos de Flp1p o de su localización resulta en la desregulación de la respuesta a estrés, produciéndose efectos como pérdida de eficiencia en el bloqueo de la progresión celular o la aparición de focos de recombinación. Todas estas evidencias apuntan a que Flp1p participa en la (auto-) regulación del grado de activación del checkpoint de replicación necesario para una respuesta celular adecuada en situaciones de estrés replicativo.