Desoxirribonucleasas de StreptomycesPurificacion y caracterizacion de un enzima con un nuevo tipo de especificidad en Streptomyces Glaucescens

Resum

Streptamyces glaucescens y otras especies de streptamyces presentan una dnasa periplasmica cuya sintesis esta sujeta a contro nutricional hemos purificado la actividad de s.Glaucescens a homogeneidad aparente por cromatografia de fosfocelulosa, seguida de las siguientes cromatograficas: Heparina-agarosa, cibarcon blue f3-ga sefarosa, sefadex g-75 y mono q fplc. El enzima presento un peso molecular aparente de 39600, un pi de 8.15 aproximadamente, un ph optimo de 7.5 y un requerimiento absoluto pro cationes divalentes en la reaccion. Es inhibido por altas concentraciones de sal, hg2+ o iodoacetato, agentes quelantes o residuos fosforicos, y estimulado por dimetilsufoxido. La nucleasa muestra mayor afinidad por adn de doble hebra que por adn de cadena simple, y no hidroliza arn. Produce asimismo "nicks" en adn de doble hebra, y degreada and circular, generando extremos terminales 3'-oh y 5'-p. Mediante experimentos de anlisis cromatografico de los extremos de los fragmentos generados y "footprinting" se ha determinado que el enzima reconoce y corta preferentemente en la secuencia dgdg, siendo la primera nucleasa descrita con esta especificidad.