Análisis preliminar de paracoccidionides brasiliensis. Utilización del gen ura3 como marcador genético

Resumen

La paracoccidioidomicosis en humanos, es una micosis sistémica causada por el hongo dimórfico Paracoccidioides. Dicha micosis está restringida a Centro y Sudamérica. La infección comienza con la inhalación de los propagulos fungicos, los cuales buscan el epitelio alveolar pulmonar transformándose en levaduras, que es la forma patógena. Hasta ahora, excepto el polimorfismo genético detectado por análisis de RAPD y de RFLP, no existen datos acerca del fenoma de este hongo. En esta tesis se presenta la secuencia de 51019 pb. El contenido total de AT es de 53,64%. Hemos identificado 17 ORFs (8 de ellos parciales) que ocupan el 46,32% de la secuencia completa, un valor menor que el 72% descrito para Saccharomyces cerevisiae. 15 genes tienen genes homólogos en levaduras u hongos, uno muestra homología con una proteína de función desconocida de Bacillus halodurans y otra proteína que muestra homología con una proteína Acil coenzima A deshidrogenasa de Pseudomonas aeruginosa. Se han encontrado intrones en 10 genes, las señales de procesamiento de dichos intrones sigen el consenso descrito para levaduras y hongos, desviándose del consenso existente para levaduras. Por otra parte se ha aislado el gen URA3 de Paracoccidionides braisliensis y se ha construido un cassette URA-blaster similar al descrito para el caso de Candida albicans, con el fin de ser utilizado como herramientas para la transformación de dicho hongo. Además se construyó otro plásmido, utilizando el gen de resistencia a la higromician como marcador de selección, con el fin de obtener una cepa Ura- para Paracoccidiondes brasiliensis.