Secreción y dimorfismo en yarrowia lipolyticaestudio de los genes yiscj1 y yihoy1

Resumen

En Yarrowia lipolytica existen dos grandes líneas de investigación: estudio del proceso de secreción y su aplicación en la producción de proteínas heterólogas y estudio del dimorfismo. En función de esto se ha dividido este trabajo en dos partes que comprenden cada uno de estos aspectos. En la primera parte se ha clonado y caracterizado del gen YlSCJ1 de esta levadura. Se ha llevado a cabo la deleción de este gen y analizado el fenotipo de la cepa delecionada. Se ha observado que la cepa delecionada es mas sensible a DTT y tunicamicina que la cepa silvestre. Se ha comprobado también que la deleción del gen provoca un incremento en la actividad lipásica y en la actividad de la fosfatasa ácida, no así en la actividad de la proteasas alcalina. Se ha expresado el alergeno Alt a1p del hongo Alternaria alternata en Y.lipolytica bajo el control del promotor de los genes YlMTPII y YlMTPI. Hemos comprobado que el alergeno producido por la levadura se comporta de modo similar al alergeno natural en pruebas realizadas con pacientes humanos. En la segunda parte se ha realizado el estudio del gen YlHOY1. Se ha realizado la deleción de este gen en dos fondos genéticos con tipos sexuales distintos (MATA y MATB). Las cepas delecinadas son incapaces de formar hifas. Se ha observado que la cepa delecionadas son mas invasivas en agar y que la delección afecta al proceso de conjugación. Se han obtenido diploides comprobándose que las cepas delecionadas homocigotas son incapaces de formar hifas. Además esta cepa es más invasiva de agar que los tipos silvestres. Se ha realizado el análisis de la región 5' del gen YlHOY1 determinándose que la expresión de este gen está regulada por un factor de transcripción de la familia GATA. Se han realizado geles 2D de proteínas de extractos citoplasmáticos de hifas y levadura de la cepa E150 de Y.lipolytica y de levaduras y muestras de células crecidas 24 horas en un medio con N-acetilg