Estudio de la región promotora del gen xysa de streptomyces halstedii jm8

Résumé

Los microorganismos del género Streptomyces son bacterias Gram positivas de alto contenido en G+C, que producen gran cantidad de metabolitos secundarios y proteínas extracelulares. Entre estas destacan enzimas hidrolíticas como celulasas, quitinasas, amilasas y xilanasas. Los genes que codifican estas enzimas están generalmente inducidos por los productos de degradación de sus sustratos poliméricos y reprimidos por fuentes de carbono fácilmente asimilables como la glucosa, mediante un proceso denominado Regulación por Fuente de Carbono, Xys1, una xilanasa codificada por el gen xysA de Streptomyces halstedii JM8, ha sido caracterizada en nuestro laboratorio. El objetivo del presente estudio ha sido la determinación de las regiones del promotor implicadas en su represión por glucosa. Se ha utilizado el operon melC de S. Glaucescens como indicador para estudiar en S. Lividans versiones delecionadas y mutadas de dicho promotor. Cinco de estas deleciones y una doble mutación puntual están desreprimidas. Posteriormente ensayos cuantitativos de la actividad xilanásica en sobrenadantes de cultivo mostraron que estas versiones están parcialmente desreprimidas. Así, se han descrito tres regiones del promotor relacionadas con la represión por glucosa, y ensayos de retardo en gel han demostrado que algunas proteínas tanto de S. Lividans como de S. Halstedii se unen específicamente a dichas regiones. Por otra parte, se han intentado aislar activadores transcripcionales del promotor de xysA mediante un escrutinio basado en al expresión del gen de resistencia a neomicina controlado por el promotor de xysA. Este cassette ese integró en el genoma de S. Lividans y esta cepa fue transformada con una genoteca genómica de S. Halstedii contenida en un vector multicopia. Se buscaron colonias con una mayor resistencia a neomicina asumiendo que éstas hubiesen incorporado activadores de xysA. El nuevo método resultó inapropiado debido a q