Clonación y caracterización de homólogos de los receptores opioides

Resumen

En nuestro trabajo hemos clonado y caracterizado un nuevo gen en el pez cebra (Danio rerio), al que hemos denominado ZFOR3. Este gen presenta una alta homología con los receptores opioides de mamíferos, así como con otros receptores tipo opioide clonados por nuestro grupo en este pez, siendo esta homología mayor con el receptor opioide kappa de mamíferos. La estructura génica de ZFOR3 presenta al menos 4 exones. El primero de ellos se transcribe pero no se traduce, mientras que los tres restantes contienen la secuencia codificante de este gen. Además, ZFOR3 mantiene la estructura génica de los receptores opioides Kappa clonados en mamíferos. Su cDNA tiene un tamaño aproximado de 2.7 kb, y presenta una única fase de lectura abierta que codifica para 377 aminoácidos. El estudio de hidrofobicidad de la proteína deducida en nuestro nuevo clon muestra la existencia de siete dominios transmembrana, lo que agrupa a XFOR3 dentro de la superfamilia de receptores acoplados a proteínas G. Los estudios farmacológicos realizados sobre la proteína del gen ZFOR3, transfectado en la línea celular HEK293, indican que no se comporta como un receptor opioide clásico, al desplazar la naloxona entre un 20 y un 30% a los ligandos unidos a este receptor. Sin embargo, los agonistas opioides clásicos, sí producen estimulación de proteínas G, siendo esta mayor por agonistas tipo kappa, como son el peptido dinorfina A, y su análogo de síntesis (D-Arg6)-Dinorfina A. La expresión en el sistema nervioso del pez cebra del gen ZFOR3, difere de la obtenida para los otros receptores tipo opioide caracterizados en el pez cebra; y es similar a la observada para el receptor opioide kappa, en las estructuras conservadas entre teleosteos y mamíferos.