Análisis fenotípico del disruptoma de saccharomyces cerevisiae en respuesta al tratamiento con wortmanina

Resum

En el proyecto desarrollado en esta tesis doctoral se ha llevado a cabo la deleción y etiquetado de manera sistemática de los ORFs del brazo izquierdo del cromosoma II, contribuyendo así a la construcción de cuatro colecciones completas de mutantes nulos de Saccharomyces cerevisiae, disruptoma, que se han puesto a disposición de toda la comunidad científica. Una de estas colecciones, en concreto la colección de deletantes heterocigotos se ha utilizado para abordar un análisis fenotípico cuantitativo en paralelo de estas cepas mediante la tecnología de los microarrays de ADN. Se estudia el comportamiento de estos mutantes heterocigotos etiquetados molecularmente en presencia de wortmanina, cuya diana principal, ampliamente descrita en mamíferos, es la fosfatidil inositol 3-quinasa. El descrubrimiento de dianas moleculares secundarias permite conocer mejor la acción de la droga a nivel de la célula global. Este análisis fenotípico de 1546 cepas heterozigotas de Saccharomyces en respuesta al tratamiento con wortmanina ha permitido identificar 30 mutantes heterozigotos resistentes y 60 cepas haploinsucientes a wortmanina; algunos de estos mutantes se hallan afectados en genes esenciales para la levadura, demostrando la gran utilidad de este estudio en el análisis de mutantes en genes cuya deleción es letal. Este estudio ha permitido además determinar una serie de procesos biológicos afectados en el tratamiento con wortmanina y plantear una serie de hipótesis en cuanto a la resistencia o sensibilidad de determinados mutantes que ayudarán a profundizar en un futuro al desarrollo de compuestos antitumorales con mayor especificidad.