Estudio molecular de las proteinas hn y m del virus de la enfermedad de newcastle

Resumo

El virus de la enfermedad de Newcastle (NDV) es un virus patógeno aviar perteneciente al grupo de los paramixovirus. Posee una envoltura membranosa que rodea a una nucleocápsida helicoidal. La nucleocápsida está formada por una molécula de RNA de polaridad negativa y tres tipos de proteínas: la NP, P y L. La envoltura membranosa consiste en una bicapa lipídica, que deriva de la membrana plasmática de la célula infectada, y tres tipos de proteínas: la proteína F (de fusión) que es una glicoproteína transmembranal, formada por dos subunidades; la proteína HN(Hemaglutinina-Neuraminidasa) que es también una glicoproteína transmembranal, orientada con el dominio carboxiterminal hacia el exterior de la membrana; y la proteína M(de matriz), que no está glicosilada y se dispone en la cara interna de la membrana, formando una especie de armazón. En el trabajo se ha utilizado NDV de la cepa Clone-30, y en concreto, las proteínas HN y M han sido el objeto de estudio. En los que se refiere a la proteína HN, se ha investigado como afecta la desnaturalización térmica a la estructura y función de la misma, empleando para ello diversas técnicas, como son: el estudio de la pérdida de actividad enzimática, la influencia en el "binding" del virus a membranas, microcalorimetría diferencial de barrido, y cambios en la fluorescencia intrínseca del triptófano. Para los estudios se ha utilizado proteína HN en diferentes formas: en el NDV intacto, en envolturas solublizadas, en envolturas reconstituidas y la fracción globular soluble, correspondiente al dominio carboxiterminal externo de la proteína (CT-HN). Por este motivo, como paso previo, se ha desarrollado un sistema de obtención y purificación de la CT-HN, eliminando así los problemas que plantea el estudio de proteínas de tipo transmembtanal, que en ausencia de detergente tienden a agregar. Se ha llevado a cabo también la caracterización cinética de la activi