Estudio de la regulacion de la expresion del gen ssg1 de saccharomyces cerevisiae

Laburpena

La esporulación en Saccharomyces cervisiae es un modelo perfecto para el estudio de la esporulacion el cual es un proceso en el que la expresion secuencial y especifica de una serie de genes conduce a la formación de una estructura especializada denominada ascospora, resistente a las condiciones ambientales adversas. El gen SSG1 codifica para una exo-1,3-B-glucanasa, inducida en los ultimos estadios de este proceso. En este trabajo, hemos estudiado el promotor SSG1 para identificar las secuencias de DNA que son importantes para mantener su represión durante el crecimiento vegetativo y aquellas que son necesarias para inducir la transcripción durante la esporulación. Para ello, se construyeron un conjunto de deleciones sucesivas de la region 5 no codificante de SSG1 para analizar la actividad B-glucanasica producida por cada una de las construcciones. De esta manera se identificaron tres regiones independientes que actuan como secuencias represoras en el contexto del promotor nativo asi como un gen heterólogo, el gen lacZ de Escherichia coli, durante el crecimiento vegetativo. Ademas se hizo otras colección de deleciones que fueron analizadas durante la esporulación, lo que permitió identificar uan región distinta que se encarga de inducir la expresion de la glucanasa durante este proceso de diferenciación. En una aproximación alternativa, se ha llevado a cabo la búsqueda de genes regulatorios responsables de la expresión diferencial de SSG1. Para ello, cepas haploides portando cada una de las regiones represoras colocadas en la region 5¿de dos genes marcadores, URA3 y KanMX4, fueron sometidas a mutagenesis por integracion del transposón Tn3. El analisis de las estirpes prototrofas para uracilo y resistentes a kanamicicna, ha permitido, identificar cuatro genes implicados en la represion de SSG1: Dos de la ruta RAS/cAMP (CDC25 y CYR1) y dos del complejo mediador de la RNA polimerasa II (SIN4 y MED1).