Aplicacion de la dcr. Cuantitativa al estudio del mieloma multipleestudios de enfermedad residual minima y expresion genica

Resumo

El Mieloma múltiple (MM) es una enfermedad incurable en la que la mayoría de los pacientes recae por la persistencia de células tumorales que regeneran la enfermedad, concepto denominado enfermedad residual mínima (ERM). El análisis de la ERM ha demostrado su utilidad en la detección precoz de recaídas en otras neoplasias hematológicas, por ello tratamos de estandarizar una técnica para su seguimiento. Nuestro primer hallazgo se basa en el empleo de una nueva diana, el reordenamiento incompleto DJ de los genes de inmunoglobulinas, para su amplificación mediante PCR cuantitativa para el estudio de ERM. Esta diana tiene como principal ventaja estar presente hasta en el 60% de los pacientes con MM y además no está mutada, lo que permite la correcta hibridación de primers y sonda con la secuencia complementaria. Las técnicas estándar para seguimiento de ERM son la Citometría de Flujo (CMF) y la PCR cuantitativa en tiempo real (RQ-PCR). Su aplicación simultánea en el análisis de ERM de una serie de pacientes con MM en remisión completa (n=24) demostró que, a pesar de que la RQ-PCR resulta ligeramente más sensible y detecta ERM en mayor número de casos (17/24), la Citometría es más sencilla y aplicable a mayor número de casos (90% CMF vs. 75% RQ-PCR) resultando la técnica de elección para el seguimiento de ERM en MM. Ambas técnicas coinciden en que una reducción de la carga tumoral por debajo de 0.01% confiere un mejor pronostico. El análisis de la expresión génica de la célula tumoral constituye un marcador propio y es uno de los principales determinantes de la biología de las células. Por ello analizamos los niveles de expresión de una serie de genes supresores tumorales (p14, p15 y p16) en pacientes con MM sintomático (N=52) y con Mieloma quiescente (N=7) y encontramos una mayor expresión en los MM quiescentes respecto a los sintomáticos. Considerando sólo estos últimos, descubrimos una correlación estadísticamente sign