Caracterizacion de enzimas implicadas en la biosintesis de penicilina en penicillium chysogenum

Resumen

El desarrollo del presente trabajo se encuadra dentro de un amplio proyecto sobre la caracterizacion bioquimica y genetica de la ruta de la biosintesis de penicilina. El primero de los objetivos propuestos ha sido abordar la purificacion y caracterizacion de la enzima isopenicilina n sintasa de p. Chrysogenum que cataliza la ciclacion del tripeptido acv, la segunda etapa en la ruta de biosintesis de penicilina. Con la enzima purificada se ha llevado a cabo una caracterizacion con respecto a diferentes parametros: ph (8.0) y temperaturas optimas (25 grados c); peso molecular (39.000); punto isoelectrico (4.9), constantes de afinidad; efecto de distintos cofactores (iones ferrosos, acido ascorbico) e inhibidores sobre la actividad enzimatica. El segundo de los objetivos ha sido el estudio de la enzima fenilacetil-coenzima a:6 aminopenicilanico aciltransferasa. Esta enzima cataliza el paso final de la ruta de biosintesis de penicilina, que consiste en el intercambio de la cadena lateral de la isopenicilina n por un resto de acido fenilacetico. Se ha abordado el proceso de purificacion y caracterizacion de esta enzima con una doble vision. Por un lado se ha tratado de profundizar en los parametros que rigen la actividad enzimatica misma. Por otro se ha tratado de comprobar si la enzima aciltransferasa pura era responsable de una serie de actividades enzimaticas relacionadas con el producto final de la ruta de biosintesis. En este aspecto en este trabajo se ha puesto de manifiesto que esta proteina se configura como un complejo con varias actividades enzimaticas: g-apa aciltransferasa, isopenicilina n aciltransferasa, isopenicilina n amidasa, transacilasa y penicilina acilasa.