Caracterizacion bioquimica y genetica de la actividad fenoloxidasica del basidiomiceto pm1 (cect 2971)

Resumen

Se ha aislado un basidiomiceto ligninolitico, denominado pm1 (cect 2971), que posee una fuerte capacidad de decolorar lignina "kraft" en medio solido comparable a la de los hongos c. Versicolor y p. Chrysosporium. La unica actividad ligninolitica detectada en los sobrenadantes de cultivos en medio liquido ha sido la actividad lacasica. Esta actividad es constitutiva y aparece en tres formas enzimaticas, denominadas lacasas i, ii y iii. Se ha purificado la lacasa i, que es la enzima mayoritaria en los cultivos liquidos estaticos. Es una proteina monomerica de 64 kda, con un contenido glucidico del 6,5% y un pi de 3,6. Contiene 4 atomos de cobre por molecula y el espectro de absorcion presenta un maximo a 600nm, caracteristico del cobre de tipo 1, y un hombro a 330 nm, caracteristico del cobre de tipo 3. Se ha clonado el adn complementario del gen codificante de la lacasa i. Este gen presenta una fase de lectura abierta de 1551 bp que codifica una proteina de 517 aminoacidos, con un posible peptido señal de 21 aminoacidos. La proteina madura posee 4 sitios potenciales de n-glicosilacion y todos los aminoacidos descritos como ligandos para los 4 atomos de cobre en las "oxidasas azules". Se ha clonado el adn genomico codificante de la lacasa i, para una caracterizacion mas completa de este gen.