Aislamiento y analisis molecular del gen pyrg codificador de la omp descarboxilasa de phycomyces blakesleeanus

Résumé

Se ha aislado el gen pyrg codificador de la orotidina monofosfato descarboxilasa (omp descarboxilasa) del hongo zigomiceto phycomyces blakesleeanus, mediante el procedimiento de hibridacion heterologa, utilizando como sonda un fragmento de 170 pb del gen pyrg del ascomiceto aspergillusniger. Este fragmento incluye, una secuencia consenso encontrada en casi todos los genes secuenciados codificadores de la omp descarboxilasa procedentes de distintos organismos. Para esta tarea de aislamiento ha sido necesario construir una genoteca de adn genomico de phycomyces en el cosmido phs255. Se ha determinado la secuencia nucleotidica completa de un fragmento de 1947 pb que incluye el gen pyrg completo, asi como los sitios de inicio de transcripcion del gen. El analisis de la secuencia revela la presencia de dos intrones, de 65 pb y 67 pb de tamaño, situados, el primero entre los aminoacidos 62 y 63, y el segundo entre la primera y la segunda base del codon para el aminoacido 100. Las regiones no codificadores que flanquean al gen en sus extremos 5' y 3' presentan secuencias consenso tipicas de genes de eucariotas superiores (secuencias "tata", "caat" y secuencia señal de poliadenilacion "aataaa"). La secuencia aminoacidica deducida presenta una elevada homologia con las correspondientes a los genes equivalentes de otros organismos, alcanzando un 72% de homologia con la del gen de schizosaccharomyces pombe y un 68.5% con la del gen del basidiomiceto schizophyllum commune. La comparacion directa con las secuencias aminoacidicas deducidas de los genes equivalentes de saccharomyces cerevisiae, a. Niger, sc. Commune y el hombre (dominio omp descarboxilasa de la ump sintetasa) muestra la presencia de varios bloques de aminoacidos muy bien conservados. Se ha demostrado que el gen pyrg de phycomyces no es capaz de transformar los correspondientes mutantes de escherichia coli, s. Cerevisiae y yarrowia lipolytica. Esta falta de expresion proba