Estudio de la biosintesis de quitina en saccharomyces cerevisiaeclonacion y caracterizacion del gen cal3

Resum

La quitina es uno de los componentes estructurales de la pared celular de la levadura saccharomyces cerevisiae. El calcofluor es un compuesto que presenta afinidad por la quitina y ademas tiene efecto antifungico. En nuestro laboratorio se aislaron varios mutantes resistentes a calcofluor que finalmente definieron tres grupos de complementacion: cal1, cal2 y cal3. El primer objetivo de este trabajo fue la clonacion del gen cal3 de s. Cerevisiae por complementacion del mutante cal3, utilizando una genoteca construida en el vector centromerico ycp50. El gen cal3 muestra una fase de lectura abierta de 2013 pb lo que predice un polipeptido de 671 aminoacidos con una masa molecular estimada de 73642 dalton. La secuencia de aminoacidos deducida presenta un heptapeptido repetido 10 veces de forma consecutiva entre los aminoacidos 472 a 541 y una cola de lisinas en el extremo carboxilo. Este gen se localiza en el brazo derecho del cromosoma xii, cercano al marcador cdc3. El tamaño del transcrito de este gen es de 2,1 kb y su patron de expresion indica que podria tratarse de un gen constitutivo. La delecion del gen cal3 indica que no es un gen esencial para el crecimiento vegetativo de s. Cerevisiae. Sin embargo, las cepas carentes de el poseen niveles reducidos de quitina y son resistentes a calcofluor. Ademas, poseen un defecto drastico en conjugacion, ya que el apareamiento de dos celulas que carecen del gen cal3 conduce a un zigoto que se bloquea antes de la fusion citoplasmica de ambas. Por tanto, el gen cal3 ademas de estar relacionado con la sintesis de quitina se requiere tambien para el proceso de conjugacion.