Aproximaciónal sistema cutinolítico de trichoderma harzianum. Caracterización y análisis funcional del gen thcut1 y del factor de transcripción thctf1

Résumé

El objetivo general de esta Tesis Doctoral ha sido el estudio del sistema cutinolítico de Trichoderma harzianum. Mediante una aproximación genómica se han clonado y caracterizado los genes Thcut1 y Thctf1 de la cepa de biocontrol Trichoderma harzianum T34, que presentan una alta similitud con genes relacionados con cutinasas descritos en diversos hongos fitopatógenos. El gen Thcut1 presentó una alta similitud con cutinasas de las especies de hongos Pyrenopeziza brassicae, Botrytis cinerea y Monilinia fructicola, y con una lipasa de Aspergillus oryzae. Se encuentra como copia única en el genoma de T. harzianum T34, y su expresión se reprime por glucosa y se induce en presencia de aceite de oliva. Para analizar la actividad de Thcut1 se recurrió a una estrategia de sobreexpresión heteróloga en la cepa GS115 de la levadura Pichia pastoris. La actividad esterasa detectada en los transformantes de Pichia que expresan el gen Thcut1 confirma la naturaleza esterásica de la proteína THCUT1. Por otro lado, el gen Thctf1 presentó una similitud muy alta con un factor de transcripción activador de cutinasas (CTF1ß) descrito en Fusarium solani f. sp. pisi. Se encuentra también como copia única en el genoma de T. harzianum T34, y su expresión no se reprime por glucosa. Para determinar la función del gen Thctf1, se recurrió a una estrategia de disrupción génica. La ausencia de producción de dos alquil-pironas, no descritas previamente en el género Trichoderma, en los transformantes interrumpidos y la menor actividad antifúngica de los mismos, demuestran que el factor de transcripción THCTF1 está relacionado con la producción de metabolitos secundarios en T. harzianum T34 y con las habilidades de esta cepa como agente de control biológico.