Caracterización de las proteínas de membrana externa de la familia omp25/omp31 de brucella ovisdetección inmunológica y estudio de su implicación en la virulencia

Resumen

En el presente estudio se construyeron cepas mutantes y mutantes complementadas de la cepa rugosa natural Brucella ovis PA en los genes omp31, omp25, omp25c, omp25d y omp22, con el fin de caracterizar inmunológicamente cada una de las proteínas de membrana externa de la familia Omp25/Omp31 y evaluar su implicación en la virulencia de B. ovis. En el estudio también se incluyeron cepas de B. ovis PA complementadas con los genes omp25b y omp31b de Brucella melitensis 16M y Brucella abortus 544, respectivamente. Para la caracterización inmunológica de cada una de las proteínas de la familia Omp25/Omp31 en B. ovis PA se obtuvieron anticuerpos policlonales frente a cada una de las proteínas de la familia localizadas en la membrana externa de Escherichia coli. Los resultados nos permitieron comprobar, la inmunogenicidad en conejo de las proteínas Omp31, Omp31b, Omp25, Omp25b y Omp25c, la detección de las proteínas Omp31, Omp25 y Omp25c en B. ovis y confirmar la ausencia de Omp25b y Omp31b en esta especie. Uno de los objetivos fundamentales en este trabajo fue analizar el efecto de la inactivación de cada uno de los genes de la familia omp25/omp31 sobre las propiedades de la membrana externa y sobre la virulencia de B. ovis PA. Las diferentes pruebas realizadas para evaluar posibles alteraciones de la membrana externa (crecimiento in vitro, microscopía electrónica de transmisión, autoaglutinación y susceptibilidad a polimixina B, desoxicolato de sodio, peróxido de hidrógeno y suero no inmune de cordero) mostraron que la cepa ¿omp25c fue la más afectada pero no presentó reducción de la virulencia en el modelo del ratón a diferencia de las cepas ¿omp25d y ¿omp22. La marcada susceptibilidad de la cepa ¿omp22 al suero no inmune de cordero puede explicar, en parte su drástica reducción de la virulencia. Sin embargo, la atenuación del mutante ¿omp25d no se puede justificar por las alteraciones de la membrana externa observadas en este trabajo, ya que otro mutante no atenuado fue igual o más susceptible en todas las pruebas realizadas, por lo que la proteína Omp25d podría estar implicada en la penetración y/o supervivencia de B. ovis en las células del hospedador.