Interacciones dna-proteína en promotores asociados a islas cpg en células de mamíferos

Résumé

La metilación del DNA en mamíferos es una modificación covalente del carbono 5 de la citosina que se produce fundamentalmente en el dinucleótido CpG. El 80-90% de estos dinucleótidos están metilados y el resto se localiza en regiones de 1 Kb de tamaño que se denominan islas CpG, la mayoría de las cuales se localizan en el extremo 5' de aproximadamente el 50% de los genes de mamíferos. Una característica importante de las islas CpG es que siempre se encuentran sin metilar incluso en aquellos tejidos en los que el gen no se expresa. La metilación anormal de la isla bloquea la expresión del gen asociado a ella, lo que provoca una pérdida de función que podría contribuir a la progresión tumoral cuando el gen afectado es un supresor tumoral. De hecho, alguno de los casos descritos afecta a genes de este tipo como son el gen Rb, VHL o p16. El primer objetivo de esta tesis fue determinar si en el proceso de metilación accidental de islas CpG que se produce durante la progresión tumoral se ven afectados otros genes además de los genes supresores tumorales. Para ello, analizamos mediante la técnica del bisulfito sódico el patrón de metilación de la isla CpG asociada al gen supresor tumoral p53, a los genes de expresión constitutiva ADA y al componente RNA de la Telomerasa y también analizamos el gen específico de tejido alfa-globina humano en DNA obtenido de muestras de leucemias mieloides agudas, de líneas celulares humanas y de sangre periférica de individuos sanos. Como resultado de este análisis observamos que la metilación de novo de islas CpC que tiene lugar en la progresión tumoral puede afectar a todas las islas CpG del genoma humano y no exclusivamente a aquellas asociadas a genes supresores tumorales. Además el extremo 5' de las islas CpG es más resistente a esta metilación accidental que el extremo 3'. Nuestro segundo objetivo fue determinar qué relación hay entre islas CpG y el promotor del gen as