Determinación de fenotipos de resistencia a antimicrobianos en aislamientos clínicos bacterianos mediante espectrometría de masas maldi-tof cuantitativa

Resum

La espectrometría de masas MALDI-TOF se ha consolidado en los últimos años como una herramienta de extraordinaria utilidad para la identificación rápida y fiable de microorganismos en Microbiología Clínica. Sin embargo, la utilidad clínica de este recurso se ha visto, en cierta medida, ensombrecida por la falta de métodos basados en esta tecnología que ofrezcan una información sobre sensibilidad antimicrobiana semejante a la que ofrece el antibiograma convencional. El objetivo principal que se plantea es sistematizar un método de espectrometría de masas MALDI-TOF cuantitativa, que permita el estudio fenotípico global de la sensibilidad a los antimicrobianos en patógenos bacterianos, no solo a partir de colonia, sino también a partir de muestras, fundamentalmente de hemocultivos. Se desarrolla una metodología que permite obtener resultados de sensibilidad a antimicrobianos, en bacterias Gram negativas, con un alto grado de fiabilidad, en un corto tiempo de incubación. Tan sólo 2 horas son suficientes para antimicrobianos rápidamente bactericidas, como fluoroquinolonas o aminoglucósidos mientras que, para antimicrobianos con una actividad bactericida más lenta, como son la mayor parte de los beta-lactámicos, los resultados parecen mejores con 3 horas de incubación. Utilizando la espectrometría de masas MALDI-TOF combinada con un software desarrollado por el grupo de trabajo, se observa que los parámetros que mejor se correlacionan con la sensibilidad o resistencia del microorganismo a los antibióticos probados son el sumatorio de las intensidades de los picos obtenidos, y la intensidad del pico correspondiente a la proteína ribosómica L34. Los resultados son mejores mediante la combinación de estos dos parámetros que con cualquiera de ellos por separado. Mediante los parámetros establecidos, la fiabilidad de los resultados de sensible obtenidos es prácticamente del 100%, no existiendo diferencias significativas entre los géneros y especies de bacterias utilizados. Los resultados obtenidos a partir de hemocultivos simulados y de hemocultivos reales fueron muy similares.