Estudio de la función de rgf3p y de su regulación durante la citoquinesis en schizosaccharomyces pombe

Resumen

S. pombe posee una morfología cilíndrica cuyo mantenimiento depende en gran medida de la presencia de una pared celular externa a su membrana plasmática (Brunner and Nurse, 2000). La pared celular de los hongos y levaduras esta formada por glicoproteínas y polisacáridos (¿ y ß-glucanos y quitina). En S. pombe el componente mayoritario y el primer polisacárido que se deposita es el ß-(1,3)-glucano (45-48% de la pared) (Duran and Perez, 2004). En nuestro laboratorio se han aislado una serie de mutantes sensibles a Equinocandina, un compuesto antifúngico que inhibe específicamente la actividad ß-(l ,3)-glucán sintasa (Carnero et al., 2000). Uno de estos mutantes, denominado ehs2-1, además es termosensible, a 36°C las células se lisan, principalmente durante el proceso de división celular. ehs2-1 presenta una actividad ß-(1,3)-glucán sintasa reducida, hasta casi el 50% a la temperatura restrictiva comparado con una cepa silvestre. Mediante mapeo genético, encontramos que la mutación de ehs2-1 se hallaba asociada al marcador ade6+ en el cromosoma III (García, Blanca. Tesis Doctoral, 2002). Analizando los genes cercanos a esta región se encontraron dos ORFs, contiguas en el cromosoma, que podrían tener relación con la biosíntesis de la pared celular. Estas ORFs, denominadas rgf1+ y rgf3+, poseen un dominio RhoGEF presente en todos los reguladores positivos de las GTPasas de la familia Rho. En S. pombe hay seis proteínas que pertenecen a la familia Rho, Rholp, Rho2p, Rho3p, Rho4p, Rho5p y Cdc42p, de ellas solamente Rholp (la subunidad reguladora de la actividad ß-(1,3)-glucán sintasa) y Rho2p se han relacionado con la biosíntesis de la pared celular (Arellano et al., 1997; Arellano et al., 1996; Calonge et al., 2000). Hemos visto que rgf3+, donado en un plásmido multicopia, rescata todos los fenotipos del mutante ehs2-1, lisis a 36°C e hipersensibilidad a Equinocandina, mientras que en las mismas condiciones rgf1+ no complementa apenas el fenotipo de lisis, y solo es capaz de rescatar parcialmente el fenotipo de hipersensibilidad a antifúngicos, lo que parece indicar que es rgf3+ el gen afectado en el mutante ehs2-1. En estudios anteriores se había visto que las células que presentan niveles muy bajos de Rholp también se lisan (Arellano et al., 1996). Nosotros observamos que este fenotipo de lisis del apagado de rho1+ es muy similar al de las células del mutante ehs2-1, lo que podría indicar que rgf3+ es un regulador positivo de esta GTPasa.