Secreción de proteínas heterólogas en "Aspergillus awamori"función de las proteínas BIP y PDI

Abstract

Uno de los principales atractivos de los hongos se basa en su gran capacidad secretora de distintos enzimas y metabolitos secundarios. A pesar de que las características de los hongos filamentosos les convierten en hospedadores idóneos para la producción de proteínas heterólogas, los niveles de secreción de estas proteínas en estos organismos suelen ser bastante inferiores a los observados para las proteínas homólogas, lo que pone de manifiesto que existen distintos cuellos de botella a lo largo de su ruta secretora. Para solventar algunas de las limitaciones que existen a nivel (post)-traduccional para la secreción de proteínas heterólogas se utiliza, entre otras estrategias, la manipulación de los niveles de chaperonas y foldasas del RE. En el presente trabajo se estudiaron los efectos de las proteínas BiP y PDI sobre la secreción de determinadas proteínas homólogas y heterólogas en A. awamori, así como el efecto del estrés en estas proteínas de la ruta secretora. La sobreexpresión del gen bipA de A. awamori provoca un aumento en la secreción de la proteína heteróloga taumatina. Además, parece existir un nivel óptimo de expresión del gen bipA con el que se alcanzan los máximos niveles de secreción de la proteína heteróloga taumatina. La atenuación del gen bipA provoca una disminución en la cantidad de taumatina secretada. Las proteínas homólogas -amilasa y glucoamilasa no parecen verse afectadas ni por la sobreexpresión ni por la atenuación de la expresión del gen bipA. La sobreexpresión del gen de la proteína heteróloga taumatina en A. awamori, provoca una respuesta UPR que se traduce en un aumento de los niveles de expresión de los genes bipA y pdiA, respecto a los niveles observados en cepas no recombinantes. La principal actividad de la PDIA de A. awamori para la correcta secreción de la proteína heteróloga taumatina, parece ser la actividad proteína-isomerasa. La sobreexpresión conjunta de los genes bipA