Aislamiento y caracterización de proteínas capaces de ligar ácidos grasos en Giardia Lamblia

Résumé

Giardia es un protozoo flagelado que infecta el tracto superior del intestino delgado de muchas especies de vertebrados, entre las que se encuentra el hombre, siendo la causa más frecuente de infección gastrointestinal humana producida por protozoos parásitos. En este trabajo, hemos caracterizado algunas de las propiedades que presenta una proteína de Giardia lamblia, aislada en nuestro laboratorio, que posee características similares a una FABP, tales como: * Su peso molecular exacto. * Su capacidad para ligar ácidos grasos, junto con la cinética de desplazamiento de estos y la constante de desplazamiento. * El rendimiento en su purificación. * La capacidad que tiene de formar agregados proteicos, junto con la pérdida de funcionalidad cuando ocurre esto y su posible significado biológico. * La proporción de aminoácidos que componen un fragmento de esta proteína, poseyendo el extremo N-terminal bloqueado. También hemos conocido la secuencia de nucleótidos que la codifica, mediante la realización de diversos acercamientos genéticos tales como: * La amplificación del gen que codifica para esta proteína mediante la utilización de DNA genómico, y dos cebadores diseñados de una secuencia consenso de nucleótidos de la secuencia de esta misma proteína pero de otros organismos. * La realización de una reacción 3 prima RACE a partir de mRNA y un cebador específico de la secuencia consenso junto con dos inespecíficos creados de modo artificial. * La realización de una genoteca de expresión, la cual hemos rastreado, obtenido un clon positivo, cuya secuencia ha sido analizada, encontrando además en su interior un intrón, provocando que se discuta la idea actualmente aceptada de que los intrones entraron en el genoma de los eucariotas a través de las mitocondrias.