Isocitrato liasa de "Phycomyces blakesleeanus"estudio de su regulación "in vitro" e "in vitro"

Resum

Se ha realizado el estudio de la regulacion in vivo e in vitro de la icl de phycomyces blakesleeanus nrrl 1555(-), observando que el acetato induce o desreprime esta enzima, registrandose en cultivos con esta fuente de carbono un incremento superior al 1500% en la actividad especifica respecto a cultivos control con glucosa. La presencia de xilosa, fructosa, sacarosa y glucosa redujo la actividad especifica icl, alcanzandose el menor nivel de actividad cuando la glucosa estaba presente en el medio de cultivo. Este azucar parecio ejercer una inactivacion catabolica in vivo , con dos fases: una reversible y otra irreversible. El primer paso para el estudio de la regulacion in vitro de esta enzima lo constituyo el de su purificacion, obteniendose un rendimiento del 38% y una purificacion de 38 veces. El ph optimo fue de 6.8 y 8 para la reaccion de rotura y condensacion respectivamente a fuerza ionica baja y 5 mm de mg2+. La isocitrato liasa phycomyces mostro una cinetica de michaelis-menten con respecto a su verdadero sustrato (ds-isocitrato). En la reaccion de rotura el mg2+ se comporto como un activador no esencial de tipo mixto hiperbolico. Esta reaccion fue inhibida por los intermediarios metabolicos que se citan a continuacion ordenados de mayor a menor efecto: itaconato, maleato, oxalato, fofoenolpiruvato, succinato, 6-fosfogluconato, citrato, fumarato y malato. El mecanismo cinetico seguido por la isocitrato liasa de phycomyces fue del tipo ordenado uni-bi, en el que el succinato es el primer producto liberado. Los valores obtenidos de las constantes de velocidad de las etapas individuales de la reaccion, parecen indicar que la liberacion del segundo producto (glioxilato) del complejo enzima-glioxilato es la etapa limitante de la reaccion de rotura del isocitrato.