Detección de Chlamydia trachomatis por la técnica de PCR en muestras clínicas

Résumé

La clamidiasis es una de las enfermedades más importantes de transmisión sexual y su detección es todavía un problema en la clínica rutinaria. El método actual de elección para el diagnóstico de Chlamydia trachomatis es la amplificación de DNA por la reacción en cadena de la polimerasa (PCR), ya que esta es la técnica más sensible para la detección de la bacteria en secreciones genitales y se puede utilizar orina como muestra clínica. Considerando el impacto que la clamidiasis tiene en las clases desfavorecidas en Brasil, ya que es una de las enfermedades sexualmente transmisibles más frecuente, el objetivo de la Tesis consistió en el desarrollo un test "doméstico" para el diagnóstico de la clamidiasis, utilizando la amplificación de DNA, mediante la técnica de PCR, para la detección de C.trachomatis. El trabajo de investigación incluyó: 1,- El desarrollo de un método propio de PCR para la detección de la de C.trachomatis por PCR. 2,- Ensayos de la eficacia de dicho test para la detección de C.trachomatis en muestras clínicas, consistentes en frotis vaginales y orina masculina, procedentes de pacientes atendidos en ambulatorios públicos (Servicio de Atención de Dermatología Sanitaria del gobierno federal, Porto Alegre, Rio Grande do Soul, Brasil) y una clínica privada (Laboratorio Weinmann, Moinhos de Vento, Porto Alegre). 3,- La comparación en cuanto a sensibilidad y especificidad de detección entre el test desarrollado con el test comercial "PCR Amplicor C.trachomatis Assay" de Roche Molecular Systems (EE.UU). Para desarrollar el test de PCR propio se ensayaron tres pares "primers" -dirigidos a la amplificación de DNA plasmidial de C.trachomatis - y diversas variaciones del método de PCR, incluyendo cambios en los protocolos de extracción del DNA, de los protocolos de amplificación y reamplificación del DNA procedente de la PCR, así como un método de PCR anidada. Como control positivo para