Caracterización bioquímica y molecular del sistema de dos componentes TODS/TODT de Pseudomonas putida DOT-T1E

  1. LACAL ROMERO, JESUS
Supervised by:
  1. Juan Luis Ramos Director
  2. Tino Krell Co-director

Defence university: Universidad de Granada

Fecha de defensa: 08 April 2008

Committee:
  1. Mercedes Maqueda Abreu Chair
  2. Enrique Iáñez Pareja Secretary
  3. Fernando Rojo Committee member
  4. Eduardo Santero Committee member
  5. Ramón Díaz Oreja Committee member

Type: Thesis

Teseo: 275488 DIALNET lock_openDIGIBUG editor

Abstract

El trabajo de esta Tesis Doctoral se enfoca al estudio del sistema de regulación de dos componentes TodS-TodT de Pseudomonas putida DOT-T1E. Esta bacteria es muy resistente a compuestos aromáticos y puede usar benceno, tolueno y etilbenceno como única fuente de carbono y energía a través de la ruta TOD. Los genes de esta ruta están agrupados en el denominado operón tod, que se transcribe a partir del promotor PtodX y cuya expresión está regulada por el sistema de dos componentes TodS/TodT. TodS es una histidina kinasa sensora mientras que TodT es un regulador transcripcional. TodS reconoce en su dominio PAS amino terminal una amplia gama de compuestos aromáticos frente a muchos de los cuales la proteína incrementa su autofosforilación para posteriormente transmitir un grupo fosfato al regulador TodT. Una vez que el regulador está fosforilado, adquiere su conformación activa y tiene lugar el inicio de la transcripción a partir del promotor PtodX, dado lugar a la síntesis de las enzimas del operón tod. TodT reconoce hasta cinco sitios distintos en la región promotora agrupados en dos cajas pseudopalindrómicas y una caja mitad palindrómica, identificadas como las cajas TodT, a las que la proteína TodT se une cooperativamente. TodT contacta con la subunidad ¿ de la ARN polimerasa en la activación de la transcripción y también está implicada en la formación de una horquilla en el ADN que aproxima las cajas TodT hacia el sitio de unión de la ARN polimerasa. IHF participa positivamente en el proceso de transcripción, probablemente facilitando el doblamiento del ADN. Por otro lado, se descarta la implicación del sistema TodST en la respuesta quimiotáctica de la bacteria frente a compuestos aromáticos aunque se ha visto que dicha respuesta está modulada por genes presentes en el plásmido pGRT que porta dicha cepa, confiriendo un fenotipo quimiotáctico positivo hacia compuestos aromáticos en aquellas cepas que lo portan.