Estudio del papel de HVEM y su interacción con BTLA y CD160 en la progresión del linfoma de células B

Résumé

HVEM (TNFRSF14) pertenece a la Superfamilia de Receptores del Factor de Necrosis Tumoral (TNFRSF), que en condiciones de homeostasis, y por tanto en ausencia de respuesta inmunitaria actúa como ligando supresor al unirse en cis al receptor BTLA en la superficie de las células T, B y células dendríticas (DCs), inhibiendo su activación, aunque también puede interaccionar en trans con BTLA, inhibiendo la respuesta inmunitaria. HVEM parece jugar un papel clave en la progresión y desarrollo de los linfomas difusos de células B grandes (DLBCLs) y de otros tipos de linfomas de células B, como los linfomas B foliculares (FL). Sin embargo, la función de HVEM en estos tumores es muy controvertida. En los FLs, la mayoría de las mutaciones del gen TNFRSF14 se asocian con la pérdida de función de HVEM y una mayor progresión del tumor. En este caso, la célula B neoplásica ha perdido la capacidad de auto-regular su proliferación y activación, al carecer de la señalización inhibidora intrínseca de la interacción en cis HVEM-BTLA, lo que podría promover el desarrollo tumoral de la célula B. No obstante, la expresión de HVEM en muchos tipos de linfomas B hace pensar que HVEM podría actuar como ligando co-inhibidor al unirse en trans a BTLA expresado en las células T, y esto, podría ser empleado por el tumor como mecanismo de evasión inmunitaria. Basándonos en estos antecedentes, nos planteamos estudiar el efecto de la pérdida de expresión de HVEM, mediante el truncamiento del exón 1 codificante del péptido señal de la molécula empleando el sistema CRISPR-Cas9, en la línea de linfoma B murino A20 (perteneciente al grupo de los linfomas DLBCLs). Con esta herramienta de trabajo, hemos estudiado el desarrollo y progresión del tumor, utilizando un modelo experimental animal de linfoma B trasplantable con marcaje estable de GFP para el seguimiento in vivo del tumor. Nuestros resultados revelaron que la pérdida de expresión del péptido señal de la proteína HVEM, tras la deleción completa del exón 1 de la molécula por el sistema CRISPR-Cas9, fue suficiente para impedir la expresión en membrana de HVEM en la línea A20 GFP+. Además, observamos que la ausencia de HVEM en las células de tumor A20 condujo también al descenso en la expresión de BTLA. En la fase intermedia del desarrollo del linfoma, la pérdida de expresión de HVEM conllevó un menor reclutamiento de leucocitos infiltrantes y una mayor proporción de células tumorales en los nódulos tumorales hepáticos. Sin embargo, la capacidad replicativa in vitro y el patrón metastásico de diseminación in vivo en los órganos linfoides primarios y secundarios de las células de tumor A20 deficientes en HVEM no se vieron alteradas con respecto a la línea A20 wild type (WT). En las etapas más avanzadas del tumor, un dato llamativo fue la inusual expansión de células B residentes del timo, como respuesta a la diseminación sistémica del tumor y a la invasión tumoral de este órgano linfoide. En conclusión, la pérdida de expresión de HVEM en las células de tumor A20 no provoca alteraciones en el patrón de diseminación in vivo en los órganos hematopoyéticos primarios y secundarios. La deficiencia en la expresión de HVEM por las células B de linfoma A20 altera el reclutamiento de leucocitos infiltrantes en los nódulos tumorales del hígado en la fase intermedia del desarrollo del tumor, lo que podría considerarse una ventaja para el tumor, como mecanismo de evasión de la respuesta inmunitaria.