Caracterización químico-física y toxicológica de las lectinas antinutricionales ebulina f y selfd de frutos de sambucus ebulus l

Résumé

Los frutos de S. ebulus se han descrito como tóxicos capaces de provocar envenenamientos serios por ingestión oral. Ante la ausencia de datos se decidió estudiar la estructura y la toxicidad de la ebulina f que es la forma de la ebulina f presente en los frutos y relacionarla con el alérgeno Sam n1. Se ut8ilizó metodología utilizada previamente por los directores de la Tesis publicada en revistas internacionales indexadas (JCR) de gran prestigio. En base a la información disponible en la literatura científica se planteó la hipótesis de que la ebulina si bien pudiese compartir secuencias de aminoácidos, sería una proteína diferente del alérgeno Sam n1. Por ello se abordaron los siguientes objetivos: 1) obtener datos sobre la estructura de la ebulina f que permitieran relacionarla con el alérgeno Sam n1; 2) estudiar los efectos de su administración a ratones por vía oral e intraperitoneal; 3) determinar los tejidos que pudieran ser afectados por la administración de ebulina f. El procedimiento utilizado en este trabajo para el aislamiento de las lectinas de los frutos de Sambucus ebulus permite eliminar un mucílago plástico que estropea las columnas de cromatografía y dificulta enormemente el aislamiento de la lectinas de los frutos de S. ebulus. Los frutos de pequeño tamaño con 90 frutos por gramo, contienen aproximadamente 2,5 veces más lectina total, suma de ebulina f y SELfd, que los frutos grandes con 28 frutos por gramo. Ambos tipos de frutos se pueden dar en la misma planta. El análisis por espectrometría de masas da valores de 58.904 para ebulina f y 68.678 para SELfd, que concuerdan perfectamente con las masas moleculares aparentes descritas previamente por electroforesis en gel de poliacrilamida en presencia de SDS. El análisis por espectrometría de masas de algunos péptidos trípticos obtenidos de ambas lectinas de S. ebulus, indica que existe una relación muy cercana con las proteínas equivalentes presentes en hojas maduras de la misma planta. El análisis conjunto de tamaño molecular y secuencia de aminoácidos permite concluir que la ebulina f no es el alérgeno Sam n1 y que las propiedades del alérgeno son consistentes con una lectina monomérica presente en el polen y equivalente a la lectina SELlm presente en brotes de Sambucus ebulus. Las lectinas ebulina f y SELfd poseen una sensibilidad a pepsina ácida diferente, muy probablemente relacionada con la estructura, en particular el grado de glicosilación, pues mientras SELfd está fuertemente glucosilada, la ebulina f no lo está. Por otro lado, mientras que la lectina SELfd no presenta toxicidad en ratones por administración intraperitoneal, la ebulina f si lo hace con una LD50 de aproximadamente 2,80 mg/kg. La administración oral de ebulina f presenta también una fuerte toxicidad que provoca la muerte de los ratones con una LD50 de 5 mg/kg que contrasta con ricina administrada oralmente que pose una LD50 de 29mg/kg. Los efectos tóxicos de la administración intraperitoneal de ebulina f se traducen fundamentalmente en una profunda alteración del intestino delgado, en particular las criptas de Lieberkühn y después los villi, y en menor extensión en congestión pulmonar. Los efectos tóxicos de la administración oral de ebulina f se expresan fundamentalmente como alteraciones en músculo cardiaco, y una fuerte congestión pulmonar, sin afectarse profundamente el intestino delgado como sucede en la vía intraperitoneal. La administración conjunta de dosis subletales de ebulina f intraperitoneal y una mezcla de polifenoles del té verde por vía oral provoca una fuerte toxicidad responsable de la muerte del 60% de los ratones en 15 días provocándose una grave pérdida de la consistencia de los tejidos. La toxicidad oral de la ebulina en relación con la de la ricina debe tenerse en consideración por su posible uso ilícito.