Estudio de marcadores inmunohistoquimicos y moleculares en el diagnostico de retinoblastomas

Laburpena

En la actualidad no existe ningún marcador específico para el diagnóstico de los retinoblastomas, por lo que el objetivo de este estudio es averiguar el grado de expresión de enolasa neuronal específica, sinaptofisina y RB1 en las células tumorales malignas y la utilidad de este panel de inmunohistoquímica como una herramienta para confirmar el diagnóstico, tanto en el tumor primario como en las posibles metástasis a distancia. Tras la revisión bibliográfica realizada, se han seleccionado los anticuerpos enolasa neuronal específica, sinaptofisina y pRB (RB1) después de tener en cuenta los resultados obtenidos en los estudios inmunohistoquímicos efectuados previamente en muestras correspondientes a retinoblastomas y publicados en la literatura. El retinoblastoma es un tipo de tumor que presenta en muchos casos una necrosis muy extensa, por lo que este panel sería muy útil en el caso de tumores que presenten un alto grado de necrosis, donde apenas se identifican unas pocas células tumorales viables. El empleo de estos 3 anticuerpos también ayudaría a realizar el diagnóstico diferencial con otro tipo de neoplasias pediátricas que entran dentro de la categoría de tumores de células pequeñas redondas y azules de la infancia, sobre todo, en el caso de retinoblastomas indiferenciados en los que no aparecen rosetas. Lo que también se pretende con este trabajo es recuperar el interés por esta patología tumoral. No se debe olvidar que el retinoblastoma es el tumor ocular primario más frecuente en la edad infantil y que en los países menos desarrollados, como es el caso de Angola, todavía supone un importante problema de salud pública. Objetivos generales: •La realización de un estudio inmunohistoquímico convencional para enolasa neuronal específica, sinaptofisina y pRB (RB1). •Efectuar un estudio inmunohistoquímico con tissue microarrays con estos mismos marcadores. •Llevar a cabo un estudio mediante la técnica de hibridación in situ con fluorescencia (FISH) utilizando sondas específicas SureFISH 13q14.2 RB1 de la casa comercial Agilent Technologies. Objetivos específicos: •Comprobar que las células del retinoblastoma expresan marcadores neurales/neuroendocrinos como enolasa neuronal específica y sinaptofisina. Si esta expresión es diferente según la clasificación pT del tumor y si influye el grado de necrosis tumoral en la expresión de estos marcadores. •Estudiar si los retinoblastomas expresan la proteína pRB (RB1) y si el grado de expresión de la proteína pRB (RB1) se relaciona con el grado de agresividad del tumor. •Averiguar si existe una concordancia entre los resultados obtenidos en el estudio inmunohistoquímico convencional para enolasa neuronal específica, sinaptofisina y pRB (RB1) y los obtenidos en el estudio inmunohistoquímico con tissue microarrays. •Estudiar si la pérdida de expresión de la proteína pRB se relaciona o no con la pérdida de copias del gen del retinoblastoma (RB1). CONCLUSIONES: •Las células del retinoblastoma expresan marcadores neurales/neuroendocrinos (enolasa neuronal específica y sinaptofisina). •Esta expresión es intensa y difusa en todo el tumor. •Se expresan en todos los tumores independientemente de la clasificación pT. •Aunque la práctica totalidad (95%) de las muestras estudiadas se trata de tumores pobremente diferenciados, el marcaje es similar en un caso bien diferenciado con presencia de abundantes rosetas de Flexner-Wintersteiner. •Además, existe reactividad en los tumores con necrosis intensa, por tanto, se conserva la reactividad en todas las células tumorales, incluso en las que presentan necrosis. •La expresión intensa y difusa de la proteína pRB no se relaciona con una menor agresividad tumoral según la clasificación pT. •Después de la revisión bibliográfica realizada, se trata del primer estudio de tissue microarrays efectuado en muestras correspondientes a retinoblastomas. •Existe una buena correlación entre los resultados obtenidos con el estudio inmunohistoquímico convencional y el realizado con tissue microarrays. •En los retinoblastomas estudiados, la pérdida de la expresión de la proteína RB1 (pRB) no se relaciona con una ausencia completa de señales en el estudio con sondas específicas SureFISH 13q14.2 RB1. Es decir, no se observa ninguna pérdida de copias del gen RB1. •Las muestras que presentan un alto grado de necrosis no son válidas para poder realizar una correcta interpretación de los resultados ya que la necrosis impide la identificación de la señal que emiten estas sondas.