Aislamiento caracterizacion y estandarizacion biologica de un extracto de alternaria alternata

Resumo

Se obtienen extractos de micelio-esporas, de filtrado de cultivo y mezcla de la alternaria alternata. Se valora el rendimiento obtenido por determinacion de proteinas y carbohidratos. Se caracterizan inmunologicamente por isoelectroenfoque y electroforesis en sds-page. Se determina la actividad alergenica por elisa e inmunoblotting. Y se estandariza por pruebas cutaneas (prick) y elisa-inhibicion. El estracto de micelio-espora presenta sus bandas mas notables a pi mas acido que el filtrado de cultivo, pero ambos en un rango igualmente acido. Por sds-page se identifican hasta 12 bandas de las cuales la de 15 kilodaltons se asimila al alergeno mayor de la alternaria alternata (alt-1). De 23 a 76 kd. Tambien existe actividad alergenica. El componente glicoproteico comprende el 40% de los extractos. Con el calentamiento a 70 grados en la obtencion se pierden proteinas pero no activias alergenica. Y por ultimo, en la estandcarizacion se comprueba que el estracto mezcla supera a los extractos solos. Por todo ello, el estracto mezcla de micelio-esporas mas filtrado de cultivo resulta el mejor estracto de referencia en nuestro estudio, con una buena potencia alergenica y un alto contenido en alt-1 (39%).