Caracterización funcional de la proteína SlrA de Thermus thermophilus HB8

Resumen

El gen codificante de la proteína SlrA de Thermus thermophilus HB8 fue identificado y clonado por su capacidad para bloquear la expresión del promotor del gen de la capa S (slpA) de esta bacteria termófila en un sistema heterólogo mesófilo (E.coli). Junto a este gen, se identificaron las proteínas SlpM y la propia SlpA como potenciales reguladores de slpA. Se demostró también que fragmentos C-terminales de SlpM y SlrA podían unirse al promotor slpA en ensayos de Southwestern blot mientras que un fragmento C-terminal de SlpA se unía a la región líder de su propio mRNA, pero no al promotor. Estos datos sugerían que SlrA y SlpM podría actuar como reguladores de la transcripción de slpA, mientras que SlpA autorregularía su traducción. Además, había sido demostrado que SlpM se sobreexpresa en el exterior de las células deficientes en slrA, siendo capaz de formar una cubierta critalina similar a la capa S. Todos estos datos indicaban que la expresión de la capa S en Thermus thermophilus HB8 está sometida a un complejo sistema de regulación en el que intervienen al menos las proteínas SlrA, SlpM y SlpA, existiendo además regulaciones cruzadas entre ellas. En esta tesis con el objetivo de conocer con más detalle la función de la proteína SlrA se ha procedido a purificar la proteína y estudiar in vitro su interacción con el promotor del gen slpA utilizando distintas estrategias. Además se ha analizado la función de SlrA in vivo a través del estudio de la expresión del gen SlrA, el análisis fenotípico y bioquímico de mutantes en SlrA de Thermus thermophilus y de la sobreproducción de SlrA en su organismo de procedencia. Nuestros datos demuestran que slrA codifica una proteína de localización periplásmica de unos 28 kDa y muy bajo número de copias, que se expresa cuando la célula disminuye su velocidad de crecimiento, coincidiendo su expresión máxima con la represión de la transcripción del gen de