Caracterización clínico-molecular del receptor de andrógenos y sus isoformas en pacientes con cáncer de próstata metastásico de novo

Abstract

El cáncer de próstata (CaP) representa alrededor del 12% de los casos de cáncer de nuevo diagnostico en Europa. Es uno de los tumores más prevalentes en España y uno de los más frecuentemente diagnosticados en el mundo. Los biomarcadores de origen tumoral, como las células tumorales circulantes, los ácidos nucleicos específicos de tumor, las proteínas, etc., pueden ser detectados a través de la biopsia líquida, basada en la toma de una muestra de sangre periférica, que proporciona un medio para el diagnóstico mínimamente invasivo. Estudios recientes sugieren que tanto las plaquetas educadas por el tumor, como una de los RNAs no codificantes, los circRNA, pueden estar implicados en la regulación del CaP. En los pacientes con CaP, la causa principal a la progresión de la enfermedad y la resistencia a la castración es la alteración genética en el gen AR o en sus variantes clínicamente significativas como ARv7 y ARv567 que son constitutivamente activas y se asocian con peor pronóstico. Por ello, nos planteamos estudiar el gen AR y sus isoformas a partir de sangre periférica de pacientes con cáncer de prostáta metastásicos de novo. En este estudio se han incluido 42 pacientes diagnosticados de cáncer de próstata metastásico de novo, sin tratamiento en el momento de la toma de muestra y como grupo control para los estudios genéticos se utilizaron muestras de 16 varones menores de 35 años sin historial clínico de enfermedades de la próstata. El estudio del perfil de expresión del gen AR y sus variantes a partir de RNA de células mononucleares de sangre periférica se realizó mediante RT-qPCR en 20 pacientes, no detectamos niveles de expresión de AR-FL ni ARv7 en ningún paciente, únicamente se detectó la presencia de la isoforma ARv567 en 3 pacientes, estos pacientes presentaban un mayor número de metástasis lo que se sugiere que tenían un mayor número de células tumorales circulantes. Además, determinamos el patrón de expresión del RNA circular del gen AR en plasma de pacientes con CaP y donador sano mediante RT-qPCR, detectamos 26 pacientes (61,90%) que presentaban niveles altos de expresión de circAR en plasma, no encontramos diferencias significativas al correlacionarlo con las características clínicas ni con la supervivencia global. Sin embargo, no existen estudios previos que nos permitan comparar nuestros resultados, por lo que planteamos estudiar una serie más larga para confirmar estos resultados preliminares. Por otro lado, en el estudio del perfil de expresión del gen AR y sus variantes (ARv7 y ARv567) a partir de RNA de plaquetas circulantes de pacientes con cáncer de próstata metastásicos de novo se realizó mediante RT-qPCR a partir del RNA de plaquetas aisladas en plasma de pacientes con CaP y de donador sano, se evaluaron los niveles de expresión de AR-FL, ARv7 y ARv567 utilizando GAPDH para normalizar los niveles de expresión y el gen ITGA2B como marcador plaquetario. En nuestros resultados, observamos altos niveles de expresión en 13 pacientes para el gen ITGA2B, 23 para AR-FL, 28 para ARv7 y 24 pacientes para ARv567. Además, encontramos que el subgrupo de pacientes con altos niveles de expresión de ITGA2B estaban relacionados con una mayor mortalidad y una menor supervivencia global. Esta es la primera vez que se describe la expresión de ITGA2B con una peor supervivencia global en CaP, por lo que podría considerarse como un marcador pronóstico. En el estudio de las variantes del receptor, no encontramos diferencias significativas, sin embargo, observamos que los subgrupos con altos niveles de expresión de ARv7 y ARv567 presentaban una mayor mortalidad. A la vista de los resultados, establecimos una correlación entre la presencia de altos niveles de expresión de ambas variantes en los pacientes, encontrando que el subgrupo que presentaba ambas variantes tenía menor supervivencia global, por lo que la presencia de estas variantes a partir de plaquetas circulantes de pacientes con CaP si afectan la supervivencia global, es necesario seguir realizando estudios más a fondo sobre la actividad de las AR-V para determinar su acción en la supervivencia y la resistencia a fármacos. Además, en este trabajo hicimos un estudio genómico mediante aCGH y NGS comparando diferencias entre grupos de jóvenes y adultos con cáncer de próstata a partir de 8 muestras de tejido tumoral en bloques de FFPE. Los tumores incluidos en el estudio se agruparon de acuerdo con la edad al diagnostico mayores (5/8) y menores de 50 años (3/8). En el estudio mediante aCGH, las diferencias que se observaron a nivel cromosómico como ganancias se localizan principalmente en 3p (87,5%), 20p-20q (75%) y Xq (50%), siendo estas las de mayor recurrencia. En cuanto a las perdidas, se encuentran principalmente en 8p (62,5%), 19p (62,5%), 6q y 16q (50%). En nuestra serie la mayoría de los casos presentaban LOH a nivel de 16p11.2 (87,5%), 10q11.21 y de las regiones pericentroméricas de los cromosomas 7 y 11 (62,5 %). En resumen, el estudio de CNAs mediante microarrays genómicos nos ha permitido encontrar diferencias a nivel genómico, entre los grupos de estudio jóvenes y adultos. En las regiones alteradas de manera diferencial hemos encontrado genes implicados tanto en el desarrollo de CaP como en la metástasis. Por último, en nuestro trabajo diseñamos un panel específico para el análisis de genes que están implicados en la vía de AR (SRD5A2, SRD5A1, NR3C1). Se incluyeron un total de 8 muestras procedentes de tumor en bloque de parafina de pacientes diagnosticados con CaP, a los que se les analizó previamente las CNVs mediante la plataforma OncoScan. Hemos identificado 5 mutaciones de tipo missense, una mutación frameshift, una deleción in-frame y una mutación de tipo nonsense, de las cuales encontramos tres mutaciones en el gen AR que son catalogadas como patogénicas por los programas de predicción, sin embargo, no encontramos diferencias entre el grupo de jóvenes y adultos. Nuestro trabajo confirma la implicación de genes de la vía de AR en la carcinogénesis tumoral. Por ello, sería necesario realizar estudios funcionales que confirmen nuestros resultados y utilizar un número de muestra mayor, ya que estas alteraciones podrían utilizarse como biomarcadores y posibles dianas terapéuticas.