Detección de genes que codifican lignina peroxidasa y aril-alcohol oxidasa (AAO) en hingos ligninolíticos caracterización bioquímica y molecular de la AAO de 'Pleurotus'

Résumé

La degradación de la lignina es un proceso oxidativo, llevado a cabo por los hongos de podredumbre blanca, en el que el peróxido de hidrógeno juega un papel primordial al ser necesario para la actividad de las enzimas ligninolíticas de tipo peroxidasa y precursor del agente oxidante más potente producido por estos organismos, el radical hidroxilo. La lignina peroxidasa (LiP) ha sido una de las peroxidasas más estudiadas en relación con este proceso, aunque esta enzima no se ha controlado en todos los hongos ligninolíticos. La aril-alcohol oxidasa (AAO) es una enzima implicada en la producción extracelular de H2O2 y puede utilizar sustratos comunes a la LiP, por lo que pueden existir algunas interferencias para detectar estas enzimas en los cultivos. En este trabajo utilizamos dos sondas de DNA, una obtenida por PCR a partir de la secuencia N-terminal y una secuencia interna de la AAO de Pleurotus eryngii y otra correspondiente al gen, previamente descrito, que codifica la LiP H8 de Phanerochaete chrysosporium, para detectar la presencia de estos genes en 30 hongos. Paralelamente, clonamos y caracterizamos por primera vez el gen que codifica la enzima AAO. El gen aao de P. eryngii codifica una proteína de 593 aminoácidos, incluyendo un péptido señal de 27 aminoácidos y dos regiones conservadas en otras oxido-reductasas, localizadas en las regiones N-terminal (sitio de unión a FAD) y C-terminal (que formaría parte del centro activo) de la proteína madura.