Estudio cinetico en fase de transicion sobre la inactivacion suicida y la inhibicion irreversible de sistemas enzimaticos

Abstract

SE HAN DESARROLLADO UNOS METODOS UTILES PARA EL ESTUDIO CINETICO DE LA INACTIVACION SUICIDA Y LA INHIBICION IRREVERSIBLE DE SISTEMAS ENZIMATICOS. EN PRIMER LUGAR SE HA REALIZADO EL ANALISIS CINETICO DE MECANISMOS DE REACCION A FIN DE DESCRIBIR LA DEPENDENCIA DE LA CONCENTRACION DE PRODUCTO RESPECTO AL TIEMPO CONCENTRACIONES INICIALES DE LOS REACTIVOS Y CONSTANTES CINETICAS DEL SISTEMA. EN BASE A ESTAS EXPRESIONES ANALITICAS SE HA PROPUESTO UN DISEÑO EXPERIMENTAL QUE PERMITE COMPROBAR LA VALIDEZ DEL MECANISMO GENERAL CONSIDERADO E IDENTIFICAR EL CASO PARTICULAR CORRESPONDIENTE A LA ENZIMA EN ESTUDIO ASI COMO DETERMINAR SUS CONSTANTES CINETICAS. ESTAS CONSTANTES REPRESENTAN LAS PROPIEDADES DE AFINIDAD Y RAPIDEZ QUE CARACTERIZAN LA POTENCIAL UTILIDAD DE LOS SUSTRATOS SUICIDAS Y LOS INHIBIDORES IRREVERSIBLES EN INVESTIGACION SANIDAD INDUSTRIA ETC. LA APLICABILIDAD DE LOS METODOS DE ESTUDIO ELABORADOS SE ILUSTRA CON EL ESTUDIO EXPERIMENTAL DE LA INACTIVACION SUICIDA DE TIROSINASA POR LOS ORTO-DIFENOLES DOPA CATECOL Y DOPAMINA. TAMBIEN SE HA ESTUDIADO LA INHIBICION IRREVERSIBLE EN PRESENCIA DE SUSTRATO DE TRIPSINA ALFA-QUIMOTRIPSINA Y ATPASA DE RETICULO SARCOPLASMICO POR TOSIL-LISINA CLOROMETIL CETONA (TLCK) TOSIL-FENILALANINA CLOROMETIL CETONA (TPCK) E ISOTIOCIANATO DE FLUORESCEINA (FITC) RESPECTIVAMENTE. EN ESTE ULTIMO SISTEMA SE HAN INCORPORADO PIRUVATO KINASA Y LACTATO DESHIDROGENASA COMO ENZIMAS ACOPLADAS; ELLO HACE POSIBLE LA MEDIDA CONTINUA DE LA EVOLUCION DEL PROCESO DE INHIBICION IRREVERSIBLE A TRAVES DE LA DETECCION DE LA DESAPARICION DEL REACTIVO ACOPLADO NADH.