Caracterización del resistoma en el adenocarcinoma gástrico. Nuevas estrategias de quimiosensibilización

Résumé

El cáncer gástrico es una enfermedad muy agresiva, y que, pese a que en los últimos años su incidencia y mortalidad ha sufrido un leve descenso, sigue ocupando el quinto puesto en el orden de incidencia a nivel mundial de los distintos tipos de cáncer y el cuarto en cuanto a mortalidad. En la primera parte de esta Tesis, estudiamos la quimiosensibilización farmacológica del adenocarcinoma gástrico. De esta parte de la tesis se concluye que la expulsión activa de los fármacos de las células tumorales a través de proteínas exportadoras de la superfamilia ABC constituye una de las principales causas del fenotipo MDR propio del ACG. Entre estas bombas, MRP1 y MRP4 son las que presentan una expresión más elevada en la membrana plasmática de las células de ACG, por lo que son potenciales dianas para el desarrollo de estrategias sensibilizantes para mejorar la eficacia del tratamiento farmacológico contra el cáncer gástrico. Además, la administración de fármacos de uso común, que son capaces de inhibir a las bombas MRP, como el diclofenaco, podría ser una aproximación terapéutica eficaz para el tratamiento del ACG, al potenciar el efecto de fármacos inhibidores de receptores con actividad tirosina quinasa como el sorafenib, que no se utilizan actualmente por su poca eficacia frente al cáncer gástrico. Por otro lado, estudiamos estudiamos más concretamente el papel de MRP4 en la farmacorresistencia del Adenocarcinoma gástrico.Utilizando un modelo de sobreexpresión de MRP4 en células embrionarias de riñón humano HEK-293T, se ha podido demostrar que esta bomba es capaz de expulsar fármacos antitumorales como el metotrexato y el panobinostat y otros fármacos utilizados en el tratamiento de primera y segunda línea del ACG, como el 5-fluorouracilo, antraciclinas y derivados del irinotecán. Esto, junto con los elevados niveles de expresión de MRP4 que hemos encontrado en las muestras obtenidas de pacientes con cáncer gástrico, sugiere un papel importante de esta bomba en la quimiorresistencia del ACG. Además, utilizando la tecnología de edición genómica programada basada en el sistema CRISPR/Cas9 se han generado modelos in vitro por anulación de la expresión de proteínas MRPs en células AGS derivadas de cáncer gástrico. Estos modelos constituyen una herramienta útil para evaluar el papel de cada una de las bombas de manera individual evitando las interferencias de la actividad de otras MRPs. Utilizando células AGS con expresión endógena de MRP4, pero en las que se habían silenciado de forma permanente tanto MRP1 como MRP3, mediante CRISPR-Cas9, se ha demostrado que la curcumina, un polifenol de origen natural, y la indometacina, un antiinflamatorio no esteroideo, son eficaces inhibidores de la actividad de MRP4. Como consecuencia, la curcumina y la indometacina pueden sensibilizar las células AGS al efecto citostático de fármacos antitumorales que son expulsados por esta bomba. Por último, se ha estudiado el papel de los supresores tumorales en la quimiorresistencia del adenocarcinoma gástrico. El estudio de la relación entre el silenciamiento de supresores tumorales mediante CRISPR-Cas9, los cambios que se producen en el resistoma y su impacto en la quimiorresistencia ha revelado que la pérdida de expresión de TP53 y PTEN, pero no la de ARID1A, reduce la respuesta de las células de ACG a fármacos antitumorales utilizados en el tratamiento del cáncer gástrico, lo que no se debe a cambios en la expresión de proteínas ABC pero si de los genes UGT1A, implicado en el metabolismo de fármacos, y CD44, relacionado con un fenotipo de mayor malignidad.