Recombinación mitótica entre repeticiones invertidas de adn en saccharomyces cerevisiae

Resum

En esta tesis hemos estudiado el efecto de las alteraciones estructurales del ADN en recombinación homologada mitótica en Sacchaomyces cerevisiae. Para ello analizamos el fenotipo en recombinación de diversos mutantes afectados en transcripcion y en estructura de la cromatina, y de secuencias de ADN que forman estructuras secundarias in vivo. Los resultados más relevantes han sido el descubrimiento de que: Las alteraciones estructurales en el ADN tienen un efecto directo en la incidencia y en los mecanismos de recombinación, como se deduce del hecho de que las mutaciones afectadas en transcripción y estructura del ADN spt4-3,spt6-140,spt2 y hta1-htb1 , causan diferentes grados de hiperrecombinacion entre repeticiones directas e invertidas y un aumento en la proporción de tramos largos de conversión genica y de la asociación a inversiones respecto al silvestre. La recombinación entre repeticiones invertidas puede producirse tanto por un mecanismo de conversión génica dependiente de los genes RAD51,RAD52,RAD54,RAD55,RAD57, como por un mecanismo dependiente de los genes RAD1,RAD52,RAD59. La transcripción y las mutaciones spt estimulan la recombinación independiente de Rad51p. Los mutantes hipo-rec en fondo rad51 spt6-140 aislados en esta tesis confirman la asociación de los fenotipos de hiperrecombinación, aumento de la proporción de conversión de tramo largo y disminución de la dependencia de Rad51p de los mutantes spt6-140. La estimulación de la recombinación en los mutantes spt6-140 es producida por defectos en elongación de la transcripción de la secuencia donadora, un fenómeno que también se observa en los mutantes ppr2 ,afectados en elongación de la transcripción. Las inversiones no requieren la formación de estructuras de Holliday, sino que se producen mayoritariamente mediante un mecanismo de replicación inducida por corte(BIR) seguido por reasociación de cadenas sencillas(SSA) independ