Caracterizacion de una proteina celular (gip1) que interacciona con la replicasa del virus tylcv

Resumen

Los geminivirus son virus de plata con un genomio de DNA circular de cadena sencilla, que contiene entre 6-8 genes. El gen Rep es el único gen viral esencial para su replicación. Este gen codifica una proteína multifuncional que se une específicamente al origen de replicación viral. La presencia de esta proteína en células vegetales induce la aparición de proteínas específicas de fase S. Esta indución se asemeja a la que ocurre en algunos virus animales (adenovirus, poliomavirus.etc.). Como en estos virus, la desregulación del ciclo celular podría implicar interacciones de la proteina Rep con proteínas celulares implicadas en control del ciclo. Utilizando la técnica de Two Hybrid System, hemos aislado una proteína de S. Pombe que interacciona con pRep, a la que hemos denominado Gip1. Se ha llevado a cabo el estudio funcional del gen en S. Pombe, donde se ha visto que su deleción es leta. La construcción de un mutante condicional para este gen ha permitido hacer un análisis funcional de la proteína. Mediante este análisis se ha observado que el mutante condicional, cultivado en condiciones de no expresión de Gip1, presenta un bloqueo en la fase G1 y además es incapaz de realizar citocinesis. Este fenotipo se corresponde con mutantes en la transición mitosis-interfase, también denominados sns(mutantes septados-no en fase S). Otra característica del mutantes condicional es la presencia de un septo más grueso que el control. El análisis en detalle de la estructura del septo mediante microscopía electrónica muestra esta anormalidad en la estructura del septo se manifiesta ya en los primeras etapas de su formación. La estructura y localización de la actina no presenta, sin embargo, anormalidades. La búslqueda de homólogos de este gen tanto informática como físicamente ha permitido concluir que el gen que codifica esta proteína está conservado en todos los eucariontes. Además se ha comprobado que el g