Análisis funcional y estructural de la región controladora de locus del gen de la tirosinasa de ratón

Résumé

El objetivo principal de esta tesis es el estudio funcional y estructural de la región controladora de locus (LCR) del gen de la tirosina de ratón. Como primer objetivo parcial, se realizó un análisis de la actividad transactivadora transcripcional de la LCR. Se realizó un estudio in vivo, mediante la generación de ratones transgénicos con YACs portadores del locus completo de la tirosinasa con distintas mutaciones en la región LCR e in vitro mediante transfecciones transitorias de células en cultivo. Con ambos estudios se ha concluido que la actividad transactivadora transcripcional de la LCR reside en una región en la que se habían descrito dos posibles sitios de unión a factores nucleares, siendo necesaria la presencia de ambos sitios para la actividad. La capacidad transactivadora es independiente del promotor utilizado, pero es específica de tipo celular. Dentro de las LCRs coexisten distintas actividades, el siguiente objetivo del trabajo fue analizar la posible actividad aisladora frente a efectos de posición de la LCR en transgenes heterólogos. Este estudio se realizó tanto en el sistema homólogo mediante ratones transgénicos, como en un sistema heterólogo mediante moscas transgénicas. Ambos estudios apuntan a la existencia de actividad aisladora genómica dentro de la LCR. Como análisis preliminar del papel estructural de la LCR se analizó el posicionamiento de los nucleosomas alrededor de esa región y la posible existencia de regiones S/MAR. Los datos preliminares obtenidos parecen indicar un reordenamiento de los nucleosomas alrededor de la zona de las ventanas A y B. No se ha posido determinar la existencia de regiones S/MAR dentro de la LCR ni mediante experimentos in vitro ni mediante programas informáticos. Por último se ha analizado el contexto genómico en que se encuentra la LCR. Se ha determinado la existencia de una elevada densidad de elementos repetitivos de tipo LINE1 en el locus de l