PROCEDIMIENTOS PARA EL ANALISIS DE LA ACTIVACION FUNCIONAL DE LEUCOCITOS, PLAQUETAS Y OTRAS CELULAS.

Resumen

Procedimiento in vitro para el estudio de la activación funcional de leucocitos y de otras células cuya activación producida in vivo puede ser medida ex vivo o inducida in vitro, con base en la estabilización de las proteínas de la membrana citoplasmática y su detección utilizando técnicas citométricas cuantitativas en ausencia de manipulación adicional de la muestra que incluye las etapas de: a) incubar secuencialmente una muestra no manipulada con un inhibidor o mezcla de inhibidores específicos de una proteasa, y una mezcla de anticuerpos monoclonales conjugados directamente con fluorocromos; b) medir las emisiones fluorescentes utilizando citometría cuantitativa, de los fluorocromos enlazados a las células a través de los anticuerpos; c) analizar los resultados obtenidos utilizando una aproximación analítica multiparamétrica para la identificación de las subpoblaciones de células de interés, y dentro de ellas identificar aquellas células que expresan a las proteínas estabilizadas de lamembrana, cuantificando su expresión en forma objetiva con base en la intensidad de la fluorescencia detectada.