Ensayo en un único paso para la detección de fagocitosis - activación celular – muerte celular

Abstract

Procedimiento para la evaluación simultánea de citotoxicidad, modulación inmune y fagocitosis de un material usado como transportador de administración de fármacos en el cuerpo animal que comprende:

a) Obtener poblaciones celulares estimuladas mediante incubación de una muestra biológica procedente de un sujeto y que comprende células con el material a evaluar;

b) incubación de las poblaciones celulares estimuladas del paso a) con

- anticuerpos marcados con fluorocromos específicos de marcadores CD14, CD4, CD3 and CD45 y marcadores de modulación inmune seleccionados de TNFalpha, IFNγ, IL6, IL12, TNFβ, IL2, IL8, IL10, IL13 y IL16,

- inhibidor TAPI-2 de la secreción proteica, y

- marcadores de viabilidad celular,

donde cada marcador es detectado con un fluorocromo diferente,

c) pasar la población resultante del paso b) a través de un citómetro de flujo y medida de las diferentes emisiones fluorescentes en una única medida, y

d) evaluación del grado de células viables, células activadas y células fagocíticas en cada población celular a través de la determinación de la cantidad de señal fluorescente asociada a cada célula individual y a cada modulación inmune individual relacionada con el marcador usado.