Caracterización del transportador de membrana BCRP y sus polimorfismos en rumiantesimportancia en la aparición de residuos de fármacos en leche

Abstract

La gran importancia de la aparición de fármacos en leche se pone de manifiesto en los programas de la Agencia Europea de Medicamentos, que recogen en su normativa los límites máximos de niveles en leche permitidos para fármacos usados tanto en la prevención, como en el tratamiento de diversas enfermedades antes y/o durante la lactación, en el ganado ovino y bovino. La presencia de residuos de fármacos y contaminantes medioambientales en la leche tiene importantes consecuencias a nivel económico y sanitario. Desde el punto de vista sanitario, el consumo de antibióticos a través de la leche puede dar lugar a reacciones alérgicas en individuos susceptibles y podría estar relacionado con el desarrollo de resistencias a antibióticos en humanos. Por todo ello, es necesario conocer a fondo todos los mecanismos y factores implicados en el paso de fármacos a la leche en rumiantes. En el trabajo que recoge la memoria de Tesis Doctoral se realizó una caracterización inicial en rumiantes del transporte activo de fármacos de interés veterinario hacia la leche mediante el estudio del mecanismo principal conocido hasta ahora y recientemente establecido: el transportador BCRP. La proteína de membrana BCRP perteneciente a la familia de transportadores ABC, está presente en el epitelio mamario de los mamíferos, y se encuentra implicada en la secreción activa de fármacos hacia la leche. Además, esta proteína puede ser modulada a nivel de glándula mamaria, dando lugar a una disminución en el paso de sus sustratos a leche. Es por tanto, prioritario identificar qué fármacos pueden ser sustratos y/o inhibidores del transportador para poder estudiar posibles interacciones farmacológicas que puedan influir en la contaminación de la leche. Por todo ello nos propusimos analizar las interacciones del transportador BCRP con fármacos de interés veterinario pertenecientes a dos grupos, los antibióticos fluoroquinolónicos y los antiparasitarios pertenecientes a la familia de las lactonas macrocíclicas. Los resultados obtenidos indicaron que la fluoroquinolona danofloxacina es sustrato del transportador BCRP. En ensayos realizados utilizando ratones de laboratorio deficientes en el transportador y en ovejas de producción lechera de raza Assaf, se observó que el transportador participa en la secreción a leche de dicha fluoroquinolona. Por otra parte, los antiparasitarios selamectina e ivermectina son buenos inhibidores de la BCRP, bloqueando así el transporte de fármacos y otros compuestos desde el torrente sanguíneo hacia la leche. Además en vacas Holstein se ha descrito la existencia de un polimorfismo que afecta a la BCRP directamente relacionado con el contenido en grasa y proteína de la leche y con la cantidad de leche, importantes parámetros indicativos de la calidad y la producción láctea susceptibles de modulación. Una cuestión importante es determinar si la modificación de la BCRP afecta al transporte de fármacos en ganado vacuno, incluida la excreción a leche. Para ello es necesario disponer de modelos celulares de expresión del transportador bovino para realizar estudios sobre la diferente actividad entre las diferentes variantes de la proteína que puede estar asociada con la diferente excreción de fármacos en leche. Estos estudios suponen un gran avance científico-técnico, ya que se trata de los primeros estudios de estas características sobre un transportador ABC en animales de abasto. Así, tras la clonación de la BCRP bovina y la generación de sistemas celulares de expresión transitoria y estable de ambas variantes, estudiamos la influencia del polimorfismo sobre la funcionalidad, expresión y localización del transportador. Los resultados obtenidos mostraron una mayor actividad de la variante del transportador afectada por el polimorfismo, que se tradujo en una tasa de transporte de fármacos más elevada. El hecho de que el polimorfismo afecte al transporte directo de antibióticos es muy relevante desde el punto de vista clínico, ya que puede dar lugar a variaciones en la secreción de fármacos y otros compuestos hacia la leche. Por ejemplo, niveles inferiores a los terapéuticos no servirían para combatir infecciones a nivel de la glándula mamaria y superiores podrían dar lugar a toxicidades o desarrollo de resistencias debido al consumo de leche que contenga cantidades elevadas de residuos de antibióticos con importantes consecuencias económicas y para la salud.