Análisis de marcadores genéticos que favorecen la supervivencia de Listeria monocytogenes en situaciones de estrés

Resum

Listeria monocytogenes es una bacteria Gram positiva responsable de la listeriosis. Esta infección alimentaria puede producirse cuando los alimentos están altamente contaminados por L4 monocytogenes, afectando en especial a los grupos poblacionales de riesgo: embarazadas, recién nacidos, ancianos y personas inmunodeprimidas. Este microorganismo patógeno es capaz de adaptarse y persistir en los ambientes de la industria alimentaria, aumentando el riesgo de contaminación en el producto final (carne, queso, salmón ahumado, marisco...) y el peligro que implica su presencia en los alimentos listos para el consumo (ready to eat —RTE-), La supervivencia de L, monocytogenes en condiciones desfavorables se debe a la activación de mecanismos genéticos como respuesta al estrés celular que experimentan. El objetivo de este trabajo es conocer la presencia de varios marcadores genéticos en cepas de L4 monocytogenes aisladas en industrias de diferente origen alimentario (industria cárnica y marisco). Para el estudio de esta caracterización genotípica se ha empleado la técnica de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) para la detección de diferentes genes de interés y electroforesis para el revelado de los geles de agarosa. Alguno de estos marcadores genéticos están ampliamente ligados a determinados genotipos de L4 monocytogenes. Por ello, se hizo un estudio de tipificación de las diferentes cepas de L. monocytogenes para facilitar su posterior clasificación. La tipificación se llevó a cabo mediante diferentes técnicas: PFGE (Pulsed-field gel electrophoresis) agrupando en pulsotipos (PFGE types), MLST (Multi- Locus SequenceTyping) clasificando en secuencias tipo (ST) y MvLST (MultiVirulence Locus SequenceTyping) en tipos de virulencia (VT). La capacidad del patógeno de adaptación a ambientes de procesado en las fábricas se estudió con la detección de la Isla de Supervivencia 1 (Stress survival islet l 7 SSI 1) y la tolerancia a detergentes y desinfectantes con la presencia del transposon 6188 (Tn 6188) y el conjunto de genes bcrABC (bcrABCcassette). Por otro lado, la capacidad de virulencia de L. monocymgenes puede establecerse por la presencia de la Listeriolisina S (LLS) y el estado de la proteína Internalina A (InlA). De las 15 cepas de L. monocytogenes analizadas, 13 pertenecen a una industria carnica y 2 a la industria de marisco. Todas las técnicas de tipificación empleadas (PFGE, MLST, MvLST) mostraron 8 perfiles genéticos diferentes en las cepas de origen cárnico (ST l, ST 5, ST 8, ST 9, ST 87, ST 121, ST 199 y ST 388) y 2 nuevos perfiles en los aislados de la industria de marisco (ST 2, ST 321). Con los resultados obtenidos podemos determinar qué cepas muestran una mayor predisposición a permanecer en los ambientes de la industria alimentaria (ST 199, ST 9, ST 121, ST 8 y ST 321) o cuáles adoptan unas características que favorecerían su capacidad de infección (ST l, ST 2, ST 5, ST 87 y ST 388). Los datos obtenidos pueden ayudar a las empresas a mantener el control de L, monocytogenes en sus instalaciones y saber cuáles son las mejores estrategias para evitar su presencia y propagación por las diferentes áreas de la planta alimentaria.